体内药物分析课件.pptxVIP

离子对色谱法 分正相和反相离子对色谱法。 反相离子对色谱法将离子对试剂加入到含水流动相中，被分析组分的离子在流动相中与离子对试剂的反离子（或对离子，counter ion）生成不荷电的中性离子对，增加溶质与非极性固定相间的疏水性缔合作用，使分配系数增加，改善分离效果。RP-IPC用于分离可离子化（有机酸、碱、盐）或离子型化合物。1．离子对模型以有机碱（B）为例。调节流动相pH，使碱转变为正离子BH+形式，则BH+与流动相中离子对试剂（烷基磺酸盐）的反离子RSO3-生成不荷电的中性离子对，此中性离子对在固定相和流动相间达到分配平衡。 B + H+ ? BH+ RSO3Na ? RSO3- + Na+BH+ + RSO3- ? (BH+ ? RSO3-)m ? (BH+ ? RSO3-)s以通式表示：(B+)m + (A -)m ? (B+ ? A-)m ? (B+ ? A-)s B+: 溶质离子，A-:离子对试剂反离子，m: 表示流动相，s:表示固定相溶质离子B在固定相和流动相间的分配系数： KB = = ? [A-]m = EBA [A-]mEBA为萃取常数。溶质的分配系数决定于离子对试剂的浓度和萃取常数。萃取常数又与固定相、离子对试剂和溶质的性质、温度有关。2.影响容量因子的因素1) 离子对试剂的种类：离子对试剂的碳链长度增加，溶质的k增大；分析酸类或带负电荷的物质时，一般用季铵盐作离子对试剂，如四丁基铵磷酸盐，溴化十六烷基三甲基铵等；分析碱类或带正电荷的物质时，一般用烷基磺酸盐作离子对试剂，如正戊烷基、正己烷基、正庚烷基磺酸钠等。 2) 离子对试剂的浓度：低浓度范围内，溶质的k随离子对试剂的浓度升高而增大，最后趋于恒定。对长链离子对试剂（如正癸烷磺酸盐），当离子对试剂的浓度超过一定值时，k 反而减少，溶质的k出现极大值现象。这是离子对试剂形成胶束的结果。3) 流动相pH:对弱酸、弱碱的k影响较大。六．手性色谱法chiral chromatography药物对映体具有不同的药动学、药效学和毒理学。 DL-合霉素的疗效为D-氯霉素的一半； 普萘洛尔（propranolol）L-异构体的药物活性比D-异构体大100倍；1．手性药物分离(拆分)分析的作用对某些手性药物进行对映体的纯度检查；探索血药浓度与临床疗效的关系----生物体液中药物对映体的分离分析；在研制手性药物过程中，分别评价单个对映体的效价、毒性、不良反应及药物动力学性质。2．手性HPLC拆分法分类 包括柱前手性衍生试剂法（chiral derivatization reagent, CDR）, 手性流动相法（chiral mobile phase, CMP）和手性固定相法（chiral stationary phase, CSP）.1）CDR法 对映异构体与光学纯手性试剂反应，生成相应的非对映异构体。采用普通固定相分离。 (R) —SA → (R)—SE—(R) —SA（R）—SE + (S) —SA → (R)—SE—(S) —SA2）CMP法常用手性添加剂： （1）配基交换型手性添加剂：常用手性配基为光学活性氨基酸及其衍生物的二价金属离子螯合物。它们 和手性药物消旋体形成非对映异构配位络合物对。例如，分离DL-色氨酸手性异构体，可在流动相中加入L-苯丙氨酸-Cu2+作为手性添加剂。（2）环糊精类添加剂（cyclodextrins, CD）结构特点： 环状低聚糖，外部边缘有许多羟基，内部为相对疏水的空腔，每个葡萄糖单元有5个手性碳原子。常用：β-CD, γ-CD以及它们的各种改性CD。（3）手性离子对络合剂 带电手性药物与手性离子对络合成电中性非对映体络合物对。 常用手性离子对络合剂： （+）-10-樟脑磺酸，奎宁，奎尼丁等。 3）CSP法 常用手性固定相为： （1）Pirkle型手性固定相Pirkle实验室研究的手性固定相。主要有：电荷转移型手性固定相 固定相分子与对映体分子间发生π-π电荷转移作用。包括： π电子给予体手性固定相； π电子接受体手性固定相。氨基酸类手性固定相（2）蛋白质类手性固定相 广泛应用的是牛血清蛋白和人血α1-酸性糖蛋白键合硅胶手性固定相（通过氨基酸键合）。（3）环糊精类手性固定相六．亲合色谱法affinity chromatography, AC 是利用或模拟生物分子之间的专一性作用，从复杂生物试样中分离分析特殊物质的一种色谱方法。 AC是选择性最高的一种色谱分离模式。 具有专一亲和特性的生物分子对： 抗体与抗原； 酶与底物； 激素或药物与受体；RNA与和它互补的DNA。将上述分子对的其中之一固定在载体上，形成固定相，可用于分离分析与之有专一亲合性的