流式细胞术课件.pptVIP

* P53是一个53kD的核内磷蛋白，是一种肿瘤抑制蛋白，在细胞DNA发生破坏时，可以抑制细胞增殖。在人类肿瘤中，常发现伴有P53基因的突变：大肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胆囊癌等常发生P53基因错意突变。突变的P53在许多癌变细胞内有过渡表达，野生型P53可以与一些病毒性癌基因（包括SV40 large T、腺病毒的E1B、人类乳头状病毒的E6等）结合，形成特异性的复合物。当DNA损伤发生在细胞周期中的G1/S期时，野生型P53是重要的Checkpoint Protein。但是，目前仍不清楚点突变型的P53是否只是无意突变，或有功能改变。 * P53是一个53kD的核内磷蛋白，是一种肿瘤抑制蛋白，在细胞DNA发生破坏时，可以抑制细胞增殖。在人类肿瘤中，常发现伴有P53基因的突变：大肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胆囊癌等常发生P53基因错意突变。突变的P53在许多癌变细胞内有过渡表达，野生型P53可以与一些病毒性癌基因（包括SV40 large T、腺病毒的E1B、人类乳头状病毒的E6等）结合，形成特异性的复合物。当DNA损伤发生在细胞周期中的G1/S期时，野生型P53是重要的Checkpoint Protein。但是，目前仍不清楚点突变型的P53是否只是无意突变，或有功能改变。 * Proliferating cell nuclear antigen * 细胞因子（cytokine）是一类具有生物活性的小分子多肽或蛋白质，与免疫应答、炎症反应等密切相关：辅助性T细胞根据其产生的细胞因子及功能不同，可分为Th1/Th2两大类。Th1细胞分泌IL－2、IFN －γ及TNFβ，主要参与细胞免疫；Th2细胞分泌IL－4、IL－5、IL－6及IL－10，主要参与体液免疫。Th1/Th2细胞之间相互调节、相互平衡，其平衡失调与自身免疫病等多种疾病的发生有关系〖1〗。 细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标。目前检测细胞因子的方法很多，主要有生物活性测定法、免疫学测定法及运用分子杂交技术或多聚酶链反应技术检测细胞因子mRNA表达等〖2〗。流式细胞术检测细胞因子是近年来新建立的一种方法，该技术的突出特点是在单个细胞水平进行测定，可在同一细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，可根据细胞免疫表型区分不同的细胞亚群，进行多参数相关分析〖3〗，此方法目前国内未见报道。 * 细胞膜电位的流式分析 细胞浆和线粒体膜电位的改变可能在细胞表面受体介导的活化过程的早期，这可能与细胞发育、分化、病理有关，也被认为在细胞内部和表面之间的信号传导起作用。流式细胞仪的应用大大方便了该领域的研究。 细胞膜电位的存在部分由于跨膜的Na+、K+、Cl-的浓度梯度的存在，也部分由于生电泵的作用。静止的哺乳细胞膜电位在~10至90mV之间。动化的线粒体膜电位?100Mv，它依赖于能量代谢。原核细胞膜电位在100至200mV之间，它依赖于酶促能量代谢。细胞膜电位可用嗜脂性的阳离子指示剂或染料来测定，如Rhodamine 123（罗丹明123）、DiOC6(3)等。它的嗜脂性使得染料可自由通过细胞膜的脂质部分。嗜脂性的阳离子染料跨膜的浓度梯度由跨膜的细胞膜电位决定。当阳离子染料在细胞膜两侧平衡后，若细胞去极化即细胞膜电位下降时将导致染料从细胞释放到培养液中，若细胞超极化即细胞膜电位上升时将使从培养液中摄取更多染料。Sims 在1974年采用DiOC6(3)染料来评估RBC（红细胞）的膜电位。通过荧光技术评估细胞悬液的膜电位需要染料的浓度足够高，因为胞内的染料荧光会大大淬灭，所测定的荧光来自于胞外液体的游离染料。当细胞超极化即细胞膜电位上升时从培养液中摄取更多染料，所测定的总荧光降低，当细胞去极化即细胞膜电位下降时将导致染料从细胞释放到培养液中，所测定的总荧光增加。用流式细胞仪测定膜电位是测定胞内染料的荧光。 * 精子越老越核固缩，其PI染色，越不易染色。故1，须测定平均荧光强度。平均荧光强度大，则精子不成熟。 * Color can be used to visualize populations: when 2 antibodies are used only 4 colors are required. When antibodies are combined together a pattern emerges when bivariate histograms are displayed. The geometric clusters of events represent cells with like properties. * 等高密度大的区域细胞数多的地方。 * CA3:色霉素，以非嵌入方式与DNA的G-C碱基结合。HO：以非嵌入式与DNA的A-T碱基