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7.1.4印迹酶 分子印迹(molecular imprinting)技术概述 分子印迹原理 分子印迹技术的分类 分子印迹聚合物的制备方法 分子印迹酶 生物印迹酶 分子印迹技术：制备对某一化合物具有选择性的聚合物（MIP）的过程。这个化合物叫印迹分子P，也叫做模板分子T。 具体过程： 模板结合→聚合→去除P 形成的聚合物内保留有与印迹分子的形状大小完全一样的孔穴 分子印迹方法 自组装法 预组织法 可逆共价结合法 非共价相互作用 金属螯合作用 表面分子印迹 无机物为载体的表面印迹 固体材料的表面修饰 蛋白质的表面印迹 分子印迹酶 通过分子印迹技术可以产生类似于酶的活性中心的空腔，对底物产生有效的结合作用，并可以在结合部位的空腔内诱导产生催化基团，并与底物定向排列。 性质：遵循米氏方程，催化活力依赖反应速度常数。 印迹底物及其类似物 酶的催化是从对底物的结合开始的，产生对底物的识别可促进催化。 将催化基团定位在印迹空腔的合适位置对印迹酶发挥催化效率相当重要。通常引入催化剂团的方法为诱导法，即通过相反电荷等的相互作用引入互补基团。 印迹过渡态类似物 用过渡态类似物作印迹分子制备的印迹聚合物也能结合反应过渡态，降低反应活化能，从而加速反应。 适当地设计印迹分子和具有催化基团的功能单体，将稳定过渡态和催化基团的准确定向结合起来是提高模拟酶活力的关键。 生物印迹 生物印迹：指以天然的生物材料，如蛋白质和糖类物质为骨架，在其上进行分子印迹而产生对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。 有机相生物印迹酶 水相生物印迹酶 非水相生物印迹酶制备示意图 7.2生物酶工程 酶的蛋白质结构功能 新酶分子蓝图 选择性修饰方案 突变酶 新酶 克隆酶 产品 效用 发展 酶基因 遗传设计 遗传修饰 DNA重组技术 DNA重组技术 分子酶工程学Molecular enzyme engineering 当前的研究热点可以概括为3个方面: 一是利用基因工程技术大量生产酶制剂; 二是通过基因定点突变和体外分子定向进化对天然酶蛋白进行改造; 三是通过基因和基因片段的融合构建双功能融合酶。 酶 修饰剂 天然酶最适pH 修饰酶最适pH 猪肝尿酸酶 糜蛋白酶 白蛋白 PEG 肝素 10.5 8.2 8.0 7.4～8.5 9 9.0 天然酶和修饰酶的最适pH 7.1.2酶的人工模拟 ⑴定义:所谓人工酶(artificial enzyme模拟酶，酶模型)是指根据酶作用的原理摸拟酶的活性中心和催化机理，用有机化学和生物学的方法合成具有专一催化功能的新型催化剂。 ⑵人工酶的理论基础 人工酶的酶学基础 人工酶的设计：酶的作用机制 人工体系的识别、结合和催化 超分子化学 “主-客体”化学：主体与客体通过配位键或其他次级键形成稳定复合物的化学领域称之。 超分子的形成源于底物和受体的结合，这种结合基于非共价键相互作用。 设计要点 酶模型应为底物提供良好的微环境； 催化基团必须相对于结合点尽可能同底物的功能团相接近，以促使反应定向发生； 模型应具有足够的水溶性，并在接近生理条件下保持其催化活性。 ⑶模拟酶的分类 按照模拟酶的属性，可分为 半合成酶 主-客体模拟酶 胶束酶 肽酶 抗体酶 分子印迹酶 全合成酶 通过将催化基团并入有机化合物，控制空间构象，选择性地催化化学反应。全合成酶包括小分子有机物(大多为金属络合物)、胶束模拟酶、肽酶、抗体酶(催化抗体)、人工聚合物酶。 半合成酶 以天然蛋白质或酶为母体，用化学或生物学方法引进适当的活性部位或催化基团，或改变其结构从而形成一种新的人工酶。 Kaiser小组 黄素木瓜蛋白酶(FP) 主-客体模拟酶 利用各种有机分子(如β-环糊精、卟啉等)和具有催化功能的基团结合而制备的具有水解、氧化还原、转氨等功能的全合成酶。 全合成酶的模型分子：环糊精（cyclodextrin简称CD） ?-环糊精分子结构 环糊精分子的空间填充模型 胶束酶 胶束在水溶液中提供了疏水微环境，类似于酶的结合部位，可以对底物束缚。将催化基团如咪唑、硫醇、羟基和辅酶共价或非共价连接或吸附于胶束上，可使其成为具有酶活力的胶束模拟酶。 单分子胶束酶模型 肽酶pepzyme 模拟天然酶活性部位而人 工合成的具有催化活性的 多肽。 抗体酶概述 酶与抗体的差别：酶是能与反应过渡态选择结合的催化性物质，抗体是和基态分子结合的催化性物质。 是一种具有催化功能的抗体分子，在其可变区赋予了酶的属性。 7.1.3抗体酶(abzyme) 抗体酶催化的反应类型 酰基转移反应 重排反应 氧化还原反应 金属螯合反应 磷酸酯水解反应 磷酸酯闭环反应 光诱导反