第八章抗生素药物的分析.pptVIP

第三十页，共五十九页。 SH:为抗生素标准品高剂量（dS2）所致的抑菌圈直径 SL：为抗生素标准品低剂量(dS1)所致的抑菌圈直径 UH：为抗生素检品高剂量(dT2)所致的抑菌圈直径 UL：为抗生素检品低剂量(dT1)所致的抑菌圈直径 ? ? 第三十一页，共五十九页。 要求： 1、高剂量抑菌圈直径应为20~24nm，个别可为18~24mm，高剂量与低剂量抑菌圈直径之差应大于或等于2mm。 2、底层琼脂20ml，上层5ml，每一检品所用平板不少于4个。 3、等距安置小钢管4个，相对角为同一物质。 4、 θ为100±10%（更精确要求100±5%） 5、标准品与检品同质 第三十二页，共五十九页。 三剂量法： 应用高、中、低三种剂量，在同一实验条件下比较标准品及检品溶液的抑菌圈大小，以求得检品效价的方法。 第三十三页，共五十九页。 第三十四页，共五十九页。 ? ? S3:为抗生素标准品高剂量（dS3）所致的抑菌圈直径 S2: 为抗生素标准品中剂量（dS2）所致的抑菌圈直径 S1: 为抗生素标准品低剂量（dS1）所致的抑菌圈直径 U3：为抗生素检品高剂量(dT3)所致的抑菌圈直径 U2：为抗生素检品中剂量(dT2)所致的抑菌圈直径 U1: 为抗生素检品低剂量(dT1)所致的抑菌圈直径 第三十五页，共五十九页。 要求： 1、标准品中剂量抑菌圈直径15~18mm 2、高、中、低剂距为1:0.8 3、每一检品不得少于6个平皿 4、每板上等距安放小钢管6个 5、θ: 100±10%（100%±5%） 第三十六页，共五十九页。 三 影响抗生素效价管碟法测定结果的因素及其控制 （一）影响抑菌圈形状的因素与控制 1．稀释抗生素用的缓冲液的PH值、盐浓度的影响 . pH值低或含盐浓度高，就会不显抑菌圈或呈卵圆形抑菌圈。这是因为抗生素溶液的盐浓度高或pH值过低，可能改变抗生素分子的解离状态，影响了抗生素对试验菌抑制作用。 2．制各琼脂培养基菌层，加菌时培养基温度的影响 3．测试用的器材洗净度的影响 4 双碟培养温度的影响 5 其他操作的影响 第三十七页，共五十九页。 （二）影响抑菌圈边缘清晰度的因素与控制 1 试验菌长时间放置．菌群中的一些菌株生理特性有所变化，或是生长速度改变，或对抗生素的敏感度有所变化，往往出现双圈，抑菌圈的边缘不清。 在检定时菌层培养基中的菌量影响抑菌圈，菌层培养基中的菌量过低，抑菌圈边缘模糊不清，菌量过高、使抑菌圈太小并且影响试验菌灵敏度。因此，在正式检测之前，找出最适菌量。 2 培养基的原材料品种与质量，生测用培养基用的原材料的选择很重要。 3调节培养基的pH值或增加适量的盐浓度可使抑菌圈清晰. 4．不适当延长双碟的培养时间，使抑菌圈边缘不清。 第三十八页，共五十九页。 抗生素效价管碟法测定的操作技术 操作分为八步： 1试验菌的纯化与悬液的制备 2 缓冲液、灭菌水与培养基的制备 3标准品、供试品的称量、溶解与稀释 4 双碟的制备及放管 5 滴加药液 6恒温培养 7 测量抑菌圈直径或面积 8 计算 操作流程： 第三十九页，共五十九页。 第四十页，共五十九页。 四、比浊法与管碟法比较 比浊法 管碟法 优点 1、快速 1、结果较稳定 2、客观、精确 2、大批量 3、无扩散影响 缺点 1、对样品洁净度要求高 1、扩散因素影响较大 2、实验要求较严 2、时间长（2天) 3、操作繁琐,人为因素的干扰 第四十一页，共五十九页。 第二节 抗生素类药物的鉴别 第四十二页，共五十九页。 第八章 抗生素药物的分析 第一页，共五十九页。 第一节 概 述 抗生素的概念： 具有抑制或杀灭微生物的一类物质。 抗生素的特征： 生物体在生命活动过程中合成的次级代谢产物。 性质不稳定，易降解、聚合 纯度一般较低 临床上会引起不良反应 临床应用广泛，影响大 第二页，共五十九页。 抗生素药品质量研究的项目： 性状及鉴别试验，含量测定或效价测定，酸碱度测定，澄明度，水分或干燥失重，安全试验（异常毒性），热原，降压物质，无菌。 其他检查：组分、杂质、晶型、比旋度、灰分、重金属、熔点等。 抗生素药品分析常用的方法： 物理方法:旋光法、紫外、红外、色谱等 化学方法（专属性不强）：功能团反应，鉴别和含量的测定。容量分析法：酸碱滴定（青霉素含量测定）和碘量法。 生物学方法：酶反应、微生物法测定效价 第三页，共五十九页。 第二节 抗生素效价微生物检定法 一、微生物检定法定义： 是利用微生物发育时对某些物质的特殊依赖性，按这些物质对微生物生长的影响，对他们作出定量鉴定的方法。微生