第二十五章微生物转化.pptVIP

二、固定化细胞转化技术在微生物转化中的应用 固定化细胞转化技术自20世纪70年代问世以来．已经广泛应用于工业、农业、医学、环境保护、能源开发以及理论研究等方面，并取得了丰硕成果。 利用固定化细胞转化技术，省去了破碎细胞提取胞内酶的过程，完整细胞得到固定后，酶活损失较少，活性回收率高，并且保持了细胞内原有的多酶体系，对于一些需要多步催化的反应过程，一步即可完成。 被固定的微生物细胞可以是处于生长状态或体眠状态的活细胞也可以是死亡的细胞(但胞内酶的活力仍 存在) 第三十一页，共四十八页，2022年，8月28日 在微生物转化过程研究最多的是固定化活细胞包埋技术。常用的包埋材料有聚丙烯酰胺(PAA)、聚氨基甲酸乙酯(PU)、海藻酸盐凝胶、二氧基硅氧烷、葡聚糖凝胶、聚乙烯醇(PVA)等。 以海藻酸钙凝胶为例，其制备过程如下：在室温条件下，将一定浓度的海藻酸钠溶液与微生物细胞混合均匀后，滴加到氧化钙溶液中，形成球珠。 第三十二页，共四十八页，2022年，8月28日 Kaul等采用了海藻酸盐固定化生物催化剂(简单节杆菌)和底物(氧化可的松)进行碳一位和二位脱氢反应研究。 每个凝胶珠都可以看成是一个小的生物反应器，由于缩短了扩散距离，转化率明显提高，反应结束后细胞还可以回收并重复使用 第三十三页，共四十八页，2022年，8月28日 三、双水相转化技术在微生物转化中的应用 双水相转化技术早期主要用于生物分子和细胞的分离与纯化。 这是由于生物产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需要经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固一液分离带来了困难，另外这些产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境特别敏感．为了克服这些缺点．出现了双水相技术。近年来，该技术开始应用于微生物转化过程．为生物催化过程引入了一种全新的反应体系 第三十四页，共四十八页，2022年，8月28日 第一页，共四十八页，2022年，8月28日 第一节 微生物转化反应概述 第二页，共四十八页，2022年，8月28日 生物转化 是指外来化合物在体内，细胞或酶的作用经过一系列化学变化形成其衍生物或分解产物的过程，也成为代谢转化。 生物转化常利用生长中的菌体，休止的菌体，酶，固定化酶以及固定化菌体作为母体进行药物的转化。主要的优点有反应的区域专一性和立体专一性。 第三页，共四十八页，2022年，8月28日 早在2500年前的春秋战国时期，人们就已经知道制酱和醋。 在宋代，采用老的曲子进行接种酿酒。不过当时人们并没有认识到可以利用微生物来合成化学物质。 1864年巴斯德利用乙酸杆菌将乙醇氧化为乙酸。 工业化的里程碑是50年代美国普强药厂利用微生物黑根霉的羟化酶将黄体酮转化为11α-羟基黄体酮，即对甾体化合物的结构改造。 固定化细胞，基因重组等技术的发展，能将几种不同合成基因构建到同一个工程菌中使得一次培养同时进行几步转化反应，使微生物转化在天然药物修饰中发挥更重要的作用。 微生物转化的发展 第四页，共四十八页，2022年，8月28日 第一阶段： 菌体生长阶段，在该阶段中主要是供给菌体丰富的营养，使其充分繁殖发育。（温度，pH，通气条件，培养及成分。） 第二阶段： 微生物转化阶段，一般在生长阶段结束时加入底物溶液，有些还需加入诱导剂。 微生物转化的不同阶段 第五页，共四十八页，2022年，8月28日 分批培养转化法 利用酶进行生物转化 应用渗透细胞进行生物转化 应用孢子进行生物转化 应用固定化细胞进行生物转化 应用干燥细胞进行生物转化 静息细胞转化法 常用的转化方法 第六页，共四十八页，2022年，8月28日 微生物转化实验概要过程如下： 选择需要的菌株 培养成熟菌丝或孢子 选择合适的转化方式 转化培养或转化菌丝及孢子悬浮液转化 转化液的分离提取 产品纯化 微生物转化的过程 第七页，共四十八页，2022年，8月28日 由有活性中心都和特殊空间结构的酶作为催化剂； 酶催化作用的速度极快； 在常温常压和中性条件下进行高效转化反应，简化设备，降低成本； 生物转化的专一性，故底物不要求很纯（Ex. 粗淀粉） 转化过程容易调节（简单的用酸，碱，温度，离子调节） 转化过程产生杂质少，过程无毒，无臭，无味，可用于食品，医疗。 把含酶细胞或酶本身固定在载体上，可使转化过程连续化。 酶来源广泛。 可以实现化学反应无法做到的转化。 微生物转化的特点 第八页，共四十八页，2022年，8月28日 第二节 生物转化反应类型 第九页，共四十八页，2022年，8月28日 氧化反应 还原反应 缩合反应 脱氢反应 烷烃双端氧化 碳链氧化降解 1 2 3