实验多抗制备免疫比浊.pptxVIP

实验多抗制备免疫比浊;沉淀反应;本次实验内容;一、本次实验的目的：;沉淀反应（precipitation）;分类;思考：抗原抗体反应的四大特点？;沉淀反应的特点;凝胶内沉淀试验(gel phase precipitation);★根据实验目的与方法不同，可将固相内沉淀验分为2类： （一）免疫扩散 ①单向免疫扩散试验 (single gel diffusion test) ②双向免疫扩散试验 (double gel diffusion test) （二）凝胶免疫电泳 (gel immuno-electrophoresis) ;一、单向免疫扩散试验;(二) 操作步骤（平板法）;单向辐射状免疫扩散 上排为5个不同的参考，中、下排为患者血清，下排右2为一异常病理血清;(三) 方法评价;(四) 影响因素;3. 抗体稀释度 抗体浓度大，沉淀环小，则敏感度低；抗体浓度小，沉淀环增大，不同浓度抗原间的差别较显著，敏感度高。但沉淀环过大，常造成边缘糊不清，致使测量误差也增大。因此要求在沉淀环清晰的基础上加大稀释度以提高敏感度。;二、双向琼脂扩散试验;(二) 操作步骤（平板法）;第19页/共48页;(三) 双向免疫扩散试验的应用;沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系;2. 抗原性质分析; 三种扩散基本图型 ;3. 抗体效价滴定;;4. 抗体或抗原纯度鉴定;双扩散试验优缺点;;免疫浊度测定（一）基本原理：;（二）类型;第31页/共48页;1 透射免疫比浊法;方法评价：;2 散射免疫比浊法;3 免疫胶乳比浊法;（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减;方法评价;总评价;(三)免疫比浊法主要影响因素;1 抗原抗体比例;第41页/共48页;第42页/共48页;2 抗体的质量;3 抗原抗体反应的溶液;4 增浊剂的使用;本次实验内容;血清的采集与处理 取血方法： 血清的采集：耳缘静脉取血或颈动脉取血。 血清处理： 取好血后，放入37℃，30min后，使血清充分析出（不能冰冻，否则产生溶血），经3000rpm/5min分离血清，剩余放进-20℃冰箱保存。;感谢您的欣赏