溶液配制分析和总结.docx

各操作步骤试剂与缓冲液的配制 碱裂法提取质粒 1、LB 培养基（配制 1） 胰化蛋白胨 1% 酵母提取物 0.5% NaCl 1% （pH7.0） 方法：分别称取胰化蛋白胨 10 g、酵母提取物 5 g、NaCl 10 g，溶于 950 ml 去离子水中，加热直至溶质全部溶解。用 5 mol · L-1 NaOH(约 0.2ml)调 pH 至 7.0。用去离子水定容至 1 L。在 0.1 M pa 高温下蒸汽灭菌 20 min。(若制备固体培养基定容前加入 2%的琼脂，加热使其溶解，调 pH 至 7.0。再用去离子水定容至 1L。在 0.1 M pa 高压下蒸汽灭菌 20 min。) 2、碱裂解溶液Ⅰ(配制 100 ml) 葡萄糖 50 mmol/L Tris-Cl(pH 8.0) 25 mmol/L EDTA (pH 8.0) 10 mmol/L 方法：分别称取 0.9909 g 葡萄糖、0.3029 g Tris 、0.3722 g EDTA 置于 100 ml 的烧杯中，加入 80 ml 的蒸馏水使之溶解，用浓盐酸调 pH 至 8.0 后转入容量瓶中定容至 100 ml。在 0.1 M pa 压力下灭菌 15 min，装于棕色试剂瓶中保存于 4℃。 3、碱裂解溶液Ⅱ(配制 100 ml) 0.005 mol/L NaOH 1% (m/V) SDS 方法：分别称取 0.02 g NaOH 、1 g SDS 置于 100 ml 的烧杯中，加入 80 ml 蒸馏水使之溶解，转入容量瓶中定容至 100 ml。装于棕色试剂瓶中，室温保存。注：碱裂解溶液Ⅱ要现用现配制，室温下使用。 4、碱裂解溶液Ⅲ(配制 100 ml) 5 mol/L 乙酸钾 60.0 ml 冰乙酸 11.5 ml H2O 28.5 ml 方法：用量筒分别量取 5 mol/L 乙酸钾 60.0 ml［5 mol/L 乙酸钾的配制(100 ml)：称取 29.4420 g 乙酸钾置于 100 ml 的烧杯中，加入 80 ml 蒸馏水使之溶解， 转入容量瓶中定容至 100 ml。］、11.5 ml 冰乙酸于 100 ml 的容量瓶中，加蒸馏水定容至 100 ml。装于棕色试剂瓶中保存于 4℃。用时置于冰浴中。 5、STE 溶液(配制 10ml) 0.1 mol/L NaCl 10 mmol/L Tris-Cl(pH 8.0) 1 mmol/L EDTA (pH 8.0) 方法：分别称取 0.0584 g NaCl 、0.0121 g Tris、0.0037 g EDTA 置于 50 ml 的烧杯中加入 5 ml 的蒸馏水使之溶解，用浓盐酸调 pH 至 8.0 后转入容量瓶中定容至 10 ml。装于棕色试剂瓶中，室温保存。 6、TE(pH 8.0)缓冲液(配制 10ml) 100 mmol/L Tris-Cl(pH 8.0) 10 mmol/L EDTA(pH 8.0) 方法：分别称取 0.1211 g Tris 、0.0372 g EDTA 于 50 ml 的烧杯中加入 5 ml 的蒸馏水使之溶解，用浓盐酸调 pH 至 8.0 后转入容量瓶中定容至 10 ml。分装后在 0.1 M pa 高压下蒸汽灭菌 20 min，装于白色试剂瓶中室温保存。 7、1 mg/ml 胰 RNase (配制 2ml) 用 2 ml TE(pH7.6)溶解 2 mg 粗制胰 RNase Ⅰ，置于 EP 管中保存于 4℃。注：TE(pH7.6) 缓冲液(配制 10ml) 100 mmol/L Tris-Cl(pH 7.6) 10 mmol/L EDTA(pH 8.0) 方法：分别称取 0.1211 g Tris 、0.0372 g EDTA 于 2 只 50 ml 的烧杯中，再分别加入 2 ml 的蒸馏水使之溶解，用浓盐酸分别调 pH 至 7.6 和 8.0，将两者混匀后转入同一容量瓶中定容至 10 ml。分装后在 0.1 M pa 高压下蒸汽灭菌 20 min， 装于白色试剂瓶中室温保存。 感受态细胞的制备与转化 1、0.1 mol/L CaCl2 (配制 100ml) 方法：称取 1.1098g CaCl2 置于 100ml 的烧杯中，加入 80 ml 蒸馏水使之溶解，再转入容量瓶中定容至100 ml。用0.22 μm 滤器过滤除菌，装于白色试剂瓶 中贮存于 4℃。 2、MgCl2-CaCl2 溶液(配制 100ml) 80 mmol/L MgCl2 20 mmol/L CaCl2 注：80 mmol/L MgCl2(配制 100ml)：称取 1.6264 g MgCl2，置于 100ml 的烧杯中，加入80 ml 蒸馏水使之溶解，转入容量瓶中定容至100 ml，装于白色试剂 瓶中室温保