第五章细菌的生理生化实验基本知识.pptx

第五章细菌的生理生化实验基本知识;1、氧化型与发酵型(O／F)得测定 原理:? 不同细菌对不同得糖分解能力及代谢产物 不同,这种能力因就是否有氧气得存在而异,有 氧条件下称为氧化,无氧条件下称为发酵。这 在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤 其有意义。 微球菌、非发酵菌均阴性, 葡萄球菌和肠杆菌科细菌均阳性 ;2、糖类分解试验 ;糖酵解试验;3、V-P试验 　　 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮 酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下, 被空气中氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中得胍基生成红色 化合物,称V－P(+)反应。;4、 甲基红(Methyl Red)试验 　　 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生 丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢得途径不同,可产生乳酸, 琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培养基PH值下降 至pH4、5以下,使甲基红指示剂变红。;某些细菌能分解蛋白胨中得色氨酸,生成吲哚。吲哚得存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物;尿素酶试验;7、氧化酶(Oxidase)试验 　　 氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统得终末呼 吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化,然后此氧化型细胞色素C再使 对苯二胺氧化,产生颜色反应。;大家有疑问的，可以询问和交流;8、 硫化氢(H2S)试验 　　 有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物,而 产生硫化氢气体,硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。;9、 枸椽酸盐试验: 某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源,及磷酸铵作为氮源,将枸椽酸盐分解为二氧化碳,培养基反应后成碱性,由于指示剂得作用,培养基变为兰色; 10、触酶试验??? ??? 原理?: 本试验就是检测细菌有无触酶得存在。过氧化氢得形成看作 就是糖需氧、分解得氧化终末产物,因为H202得存在对细菌就是有毒性得,细菌产生酶将其分解,这些酶为触酶(过氧化氢酶)和过氧化物酶。??? 试剂? 3％H202(新配)。??? 试验方法: 可用接种环将一菌落放于载玻片得中央,加l滴3％ H202于菌落上,立即观察有无气泡出现,也可在???落和H202混合物之上放一张盖玻片,可帮助检出轻度反 应,还可降低细胞得气溶胶颗粒得形成。或直接将3％H202加到培养琼脂斜面或平板上直接观察有无气泡出现 ;;12、石蕊牛乳试验??? 原理? 石蕊就是一种pH指示剂,当pH升至8、3时 碱性显蓝色,pH降至4、5时酸性显红色;pH接近 中性,未接种得培养基为紫蓝色故称紫乳。石蕊也 就是一种氧化还原指示剂,可以还原为白色,所以, 石蕊牛乳(紫乳)就是用来测定被检细菌几种代谢性质 得一种鉴别培养基。; 13、苯丙氨酸脱氨酶试验??? 原理? 若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶,能将培养基中得苯丙氨酸脱氨变成苯丙酮酸,酮酸能使三氯化铁指示剂变为绿色。变形杆菌和普罗菲登斯菌以及莫拉氏菌有苯丙氨酸脱氨酶得活力。? ; 14、氨基酸脱羧酶试验??? 原理? 这就是肠杆菌科细菌得鉴别试验,用以区分沙门氏菌(通常为阳性)和枸橼酸杆菌(通常为阴性),若细菌能从赖氨酸或鸟氨酸脱去羧基(一CIX)H),导致培养基pH变碱,指示剂溴麝香草酚蓝就显示出蓝色,试验结果为阳性。若细菌不脱羧,培养基不变则为黄色。;? 15、胆汁溶解试验??? 原理? 肺炎链球菌产生自溶酶,她能使正在生 长得菌体溶解,使老龄菌落中心下陷,胆盐通 过降低培养基与菌体细胞膜之间得表面张力而 加速这一过程。本试验常用以鉴别肺炎链球菌 和甲型溶血性链球菌。;? 16、明胶液化试验??? 原理? 明胶就是一种动物蛋白质,某些细菌具 有明胶液化酶,明胶经分解后,可呈现不同得 特征,有利于细菌得鉴定。; 17、β－半乳糖苷(ONPG)试验??? 原理? 细菌分解乳糖依靠两种酶得作用,一种就是 β—半乳糖苷透性酶(β-galactosidasepermease), 她位于细胞膜上,可运送乳糖分子渗入细胞。另一 种为β-半乳糖苷酶(β-gaalac-tosidase),亦称乳糖 酶(Lactase),位于细胞内,能使乳糖水解成半乳糖 和葡萄糖。具有上述两种酶得细菌,能在24—48h 发酵乳糖,而缺乏这两种酶得细菌,不能分解乳糖。 如有β-半乳糖苷酶,会在3h内产生黄色得邻硝基酚; 如无此酶,则在24h内不变色。;无动力 有动力;三糖铁(TSI)琼脂试验和二糖铁(ＫＩＡ)琼脂试验;KIA克氏双糖铁琼脂照片E、coli;;硫化氢-靛基质-动力(SIM)琼脂试验 　　 　　试