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第1页/共53页生物学微生物初级第2页/共53页基本要求： 5、专业相关知识：药品检验、食品检验、化妆品及日化产品检验、洁净操作和安全操作知识。药品、食品、化妆品及日化产品卫生微生物检验和鉴定技术知识，工具设备使用和维护知识，供试品、原材料、中间体性能和鉴别知识。6、质量管理知识：药品生产质量管理规范相关知识、一般卫生检验岗位的质量保证措施与责任。7、安全文明生产与环境保护知识：微生物检定安全操作与劳动保护基本知识，常见废品处理方法等环境保护基本知识。药品生产质量管理规范、卫生检验部门的质量保证措施与责任。第3页/共53页微生物检定工大纲见深圳市劳动局网站参考资料： 1.《中华人民共和国药典》（2005版）， 国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年；2.《药品生物检定技术》，汪穗福主编，中国医药科技出版社，1999年7月；3.《中国药品检验标准操作规范》（2005年版），中国药品生物制品检定所编，中国医药科技出版社，2005年2月；4.《微生物学教程》（第二版）周德庆，高等教育出版社； 5.《微生物学实验》沈萍等，高等教育出版社，2003年印（第二版）；6.《中华人民共和国药品管理法》 （２００１年２月２８日）7.《药品生产质量管理规范(1998年修订)》(1999年3月18日)8.《中国医学微生物菌种保藏管理办法》卫生部 1985年颁布9.《使用有毒物品作业场所劳动保护条例》（２００２年４月３０日） 10.《中华人民共和国职业病防治法》 (2001年10月27日) 第4页/共53页《药品生物测定技术》，汪穗福主编，化学工业出版社，2005年8月；第5页/共53页1. 单选题50*1时间：2小时2. 多选题10*23. 判断题30*1考试题型Click to edit text stylesEdit your company slogan第6页/共53页15243致病菌检查(大肠,沙门,铜绿,金葡)抗生素效价检查无菌检查大肠菌群限度检查细菌,霉菌总数微生物限度检查 考核内容第7页/共53页细菌的总数检查药品中细菌的计数检查是检测药物在单位质量或体积内所含有的活菌数量，用以判断药品被污染的程度和标志。细菌数越多，表面药品受到致病菌污染的机会和可能性也较大，安全性也就越差。同时细菌数计数测定也包括药物的各种原料，工具设备，操作人员及工艺流程等各个环节的卫生状况和GMP评价的一个综合依据之一。第8页/共53页细菌，霉菌总数计数第9页/共53页细菌菌数报告规则细菌数宜选取平均菌落数在30~300之间的稀释级，作为报告菌数计算的依据。*如有1个稀释级平均菌落数在30~300之间，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。*如同时有2个稀释级平均菌落数在30~300之间时，计算比值：比值=高稀释级的平均菌落数?稀释倍数/低稀释级的平均菌落数?稀释倍数当比值≤2时，以两稀释级的均值报告；当比值＞2时，以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。*如同时有3个稀释级平均菌落数在30~300之间时，以后2个稀释级计算级间比值报告。*如各稀释级的平均菌落数均不在30~300之间，以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。第10页/共53页大肠埃希菌的介绍大肠埃希菌为肠杆菌科埃希菌属代表菌。现被列为粪便污染指示菌，是口服药品常规必检项目。生物学特性1. 形态与染色2. 培养与生化反应3. 抵抗力第11页/共53页大肠埃希氏菌检查1. 增菌培养 BL2. MUG-Indole检查3. 分离培养 EMB平板4. 生化实验I M V-P C5. 结果判断第12页/共53页第13页/共53页第14页/共53页革兰氏染色法制片：涂菌 ，干燥 ， 固定 染色：1）结晶紫初染1min 2）碘液媒染 1min 3） 95％乙醇脱色30s 4）番红液复染 2min显微镜检查第15页/共53页第16页/共53页分离培养 取供试液BL培养基分别在伊红美蓝琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。菌落呈紫黑色、紫红色、红色、圆形，扁平或潲凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润然后置36±1℃温箱内，培养18～24h后取出，如有菌落生长，挑选菌落做IMVC实验，并做革兰氏染色。 第17页/共53页生化鉴定挑选EMB划线分离培养的2~3个可疑菌落：靛基质试验（I）蛋白胨水培养基中，培养24小时甲基红试验（M）磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48小时?2小时乙酰甲基甲醇生成试验（V-P）磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48小时?2小时枸橼酸盐利用试验（C）枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48~72小时第18页/共53页靛基质试验（I）甲基红试验（M）枸橼酸盐利用试验（C）第19页/共53页大肠菌群分布大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细