牙本质特异性蛋白与生物矿化.ppt

X衍射分析结果说明 磷酸钙 HAP Ca5(PO4)3OH Ca3(PO4)2 CaHPO4 Ca8H2(PO4)6·5H2O 第二十九页，共六十页，2022年，8月28日 钙磷含量的测定测定各150mg凝胶颗粒的表面Ca、P沉积量 分 组 钙含量（ug) 磷含量（ug) 空白组 4.20 0.084 BSA组 7.60 14.38 DPP组 423.2 246.8 结论：人DPP与一定的支持物结合可启动HAP成核 诱导矿化。 第三十页，共六十页，2022年，8月28日 实验动物：小型猪一周龄14-20Kg，选实验牙—第 一恒磨牙20颗，下颌切牙10颗, 牙随机分组，DPP盖髓，观察2周、1月、3月 结果：处死动物，实验牙切片HE染色 结论：DPP对牙髓损伤的修复过程比氢氧化钙更快诱导修复性牙本质形成。 DPP对培养的人牙髓细胞的作用 DPP促进生物矿化的动物实验 第三十一页，共六十页，2022年，8月28日 人牙本质磷蛋白促进牙髓创伤修复 第三十二页，共六十页，2022年，8月28日 人牙本质粉制备 乙酸脱矿 上清液A 上清液B 离子交换层析 可溶性DPP 再矿化实验 特性检测 测定P含量 蛋白含量 1M NaCL处理 牙本质磷蛋白对再矿化的抑制作用 第三十三页，共六十页，2022年，8月28日 结果 上清液A、B中的总蛋白浓度 上清液A 上清液B 吸光值（595nm) 0.054 0.280 蛋白浓度（g/l) -0.045 0.224 第三十四页，共六十页，2022年，8月28日 证明：1M NaCL提取可溶性DPP 第三十五页，共六十页，2022年，8月28日 再矿化实验 牙根磨片 实验组 对照组 再矿化液处理 1M NaCL处理 脱 矿 钙离子测定 SEM观察 MRG照片吸光度测定 第三十六页，共六十页，2022年，8月28日 再矿化液中钙含量测定 组别 样本数（n) Ca2+浓度（mg/l) X Ca2+浓度差（mg/l) d±s 实验组 16 29.31 15.5 ±8.67 对照组 16 43.31 空白 1 71.00 T检验P0.01 第三十七页，共六十页，2022年，8月28日 扫描电镜观察 实验组 对照组 第三十八页，共六十页，2022年，8月28日 显微放射照片的平均吸光度检验 组别 样本数（n) 平均吸光度 平均吸光度差值 实验组 14 0.314 0.05±0.018 对照组 14 0.367 P0.01 DPP抑制生物矿化的可能机制 可溶性（游离性）DPP的作用 第三十九页，共六十页，2022年，8月28日 目的： 利用分子生物学技术克隆和表达包 含功能区的人DPP片段，以便通过人 DPP功能片段研究促进牙齿生物矿化（发育和修复功能）作用的研究。 人牙本质磷蛋白基因片段的克隆和表达 第四十页，共六十页，2022年，8月28日 人DPP基因全序列的亚克隆及其5’端序列的克隆分析 通过酶切分析和DNA序列测定，证实DPP重组质粒（pBlueBacHis 2-DPP)带有人DPP基因。 通过基因亚克隆建立了带有人DPP基因的稳定克隆株。 采用分子克隆技术构建了含人DPP基因5’端序列的重组质粒pT-DPP-N并进行测序。 pT-DPP-N质粒（含DPPcDNA5’端序列） 生化特性：168个氨基酸，富含天门冬氨酸和丝氨酸，含RGD序列和DSS重复序列，PI为3.115，分子量为16869.1D。 第四十一页，共六十页，2022年，8月28日 2 1 564bp 2027bp pBluBacHis2-DPP的PCR扩增 产物（人DPP基因5’端序列） Lane1：λDNA/HindIII Lane2: PCR扩增产物 第四十二页，共六十页，2022年，8月28日 第一页，共六十页，2022年，8月28日 生 物 矿 化 Biomineralization 机体矿化组织在生物调控下由特殊细胞分泌有机基质，基质中蛋白质诱导钙、磷离子在基质上并按特定空间结构和时间顺序形成晶体 并生长，这个过程称“生物矿化”。 生物调控——基因调控、细胞因子介导 第二页，共六十页，2022年，8月28日 牙齿硬组织、骨 生物矿化 发育规律 发育缺陷 修复机制 牙齿再生 活髓保存 牙周组织 损伤修复 第三页，共六十页，2022年，8月28日 牙本质有机物 蛋 白 质 蛋白多糖、脂类、枸橼酸盐等 胶原—-I型为主（少量ⅢⅤⅠ型三聚体） Collagen……86% 非胶原蛋白…………..10% （non collagenous proteins NCPs)