6-BA对濒危植物大花黄牡丹不定芽增殖的影响.docxVIP

? ? 6-BA对濒危植物大花黄牡丹不定芽增殖的影响 ? ? 姚霞珍，桑利群，徐 慧，李 双，陈丽仙 （西藏农牧学院资源与环境学院，西藏 林芝 860000） 大花黄牡丹（Paeonia ludlowii）属毛茛科芍药属落叶灌木，是西藏特有濒危植物［1］，生于海拔2 900～3 200 m 的雅鲁藏布江河谷及山坡林缘。其植株高大，黄色花朵硕大，是珍贵的观赏、育种材料，属于国家二级保护植物，喜温和气候、较耐寒，抗旱能力较弱［2，3］。大花黄牡丹自然繁殖方法为种子繁殖［4-6］，存在繁殖速度慢、苗木品质弱、种苗数量缺乏等问题，大花黄牡丹的快速繁殖成为急需解决的问题。利用组培快速繁殖的方法培育优良品种苗，可以不受地区、气候的影响，且增殖速度比常规方法更快［7］，能够高效、快速地获得大花黄牡丹种苗，加速大花黄牡丹优良品种的繁育。该研究分析了基本培养基、植物生长调节剂6-BA 对大花黄牡丹不定芽诱导增殖的影响，以期为今后的相关研究提供参考。 1 材料与方法 1.1 试验材料 外植体的选择是植物组织培养的关键，外植体选择合适与否直接影响消毒、无菌体系建立以及整个组培流程的难易程度［7，8］。采集时间为2020年9月下旬、2021年3月中旬，采集地点为西藏自治区林芝市西藏珍稀濒危园林植物培育基地，在晴天午间选取健壮、无病虫害的高约1～2 m 的大花黄牡丹母株，切取其饱满、未萌发的腋芽及顶芽。 1.2 启动培养 1.2.1 启动培养基 培养基作为植物组织培养的重要材料和营养来源，其组成成分直接影响外植体的脱分化与再分化状态，是起决定性作用的因素［7，8］。本次试验选用2 种培养基进行对比分析。 培养基1：WPM+0.5 mg/L 6-BA+30.2 mg/L GA+30.0 g/L 蔗糖+7.5 g/L 琼脂，pH 为5.8～6.0。 培养基2：WPM（含20.0 g/L 蔗糖+8.0 g/L 琼脂）+0.5 mg/L 6-BA+30.2 mg/L GA，pH 为5.8～6.0。 将培养基置于灭菌锅，120 ℃灭菌20 min，然后转至超净工作台等待外植体接种。 1.2.2 外植体清洗及消毒 挑选健壮饱满大花黄牡丹的顶芽和腋芽，剥除外部2～3层鳞片，将剥好的芽于自来水下冲洗30 min，洗涤剂浸泡8～10 min，流水冲洗30 min。将清洗干净的芽转到超净工作台，用75%的乙醇浸泡灭菌20～30 s，再用2%的次氯酸钠浸泡灭菌7 min，重复2次，最后，无菌去离子水冲洗4～5遍［9］。 1.2.3 启动培养接种 将剩余芽体接种于启动培养基，每瓶接种1 个外植体，每组接种15 瓶，重复3 次，培养35～40 d。 1.3 增殖培养 在启动培养优选出的培养基中分别添加0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/L 的6-BA，筛选适宜大花黄牡丹继代苗增殖的最佳生长调节剂浓度。 在无菌条件下取初代芽，分别接入不同的培养基中，每组处理20 瓶，重复3 次。接种后每隔10 d 观察生长情况，第35 d 时取出，在无菌条件下统计株高、叶片数及增殖率。 1.4 培养条件 在组织培养过程中，光照、温度、培养基pH 是诱导木本植物器官发生的重要因素［7，8］。光照对组织褐变、试管苗成熟以及玻璃化均有显著影响，温度与酚类化合物合成以及组培苗生根有关［10，11］。该试验的培养温度为25 ℃，光照度32.4 mol/（m2·s），光周期为14 h 光照、10 h 黑暗，培养基pH 为5.8～6.0，以上所有试验均在西藏农牧学院第二实验楼进行。 1.5 数据处理 用Excel 2016 软件对数据进行统计，SPSS Statistics 26 软件方差分析，邓肯氏新复极差法进行多重比较（P＜0.05）。 不定芽增殖率=（再生不定芽的外植体数/接种外植体数）×100% 2 结果与分析 2.1 优选培养基 在启动培养试验中观察得出的数据中，WPM+30.0 g/L 蔗糖+7.5 g/L 琼脂+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L GA 更有利于不定芽生长。 在启动培养的基础上，将产生的不定芽接种到不定芽增殖分化培养基上，10 d 后可以观察到基部有不定芽产生，17 d 后单芽基部产生的不定芽生长明显。 2.2 不同浓度6-BA 对大花黄牡丹试管苗生长的影响 2.2.1 对试管苗株高的影响 不同浓度6-BA 对试管苗株高的影响见图1，5 个6-BA 处理组的株高均显著高于对照（CK），在6 个组中，6-BA 为0.5 mg/L时，试管苗平均株高最高，显著高于其他处理组合；CK 组的试管苗平均株高最低。因此，添加浓度为0.5 mg/L 6-BA 时最有利于试管苗长高。 图1 不同浓度6-BA 对试管苗平均株高的影响 2.2.2 对试管苗叶片平均数的影