6种柳树对柳蓝叶甲的抗性鉴定及主要代谢物分析.docxVIP

? ? 6种柳树对柳蓝叶甲的抗性鉴定及主要代谢物分析 ? ? 李文杰，崔露露，麻芸娇，王春荣，郭娇娇，梁海永 (1 河北农业大学 林学院，河北 保定 071000;2 河北省林业和草原科学研究院，河北 石家庄 050061) 柳树是杨柳科柳属植物的统称[1]。柳树是我国比较常见的树木，其具有很高的经济价值，是重要的固堤、护岸、防风固沙和改良盐碱地的树种[2], 而且柳树易成活，生长快速，生物量大,可以作为很好的人工用材林及生物质能源林[3]。其具有诸多种植价值，不仅具有较高的绿化价值、园林价值以及观赏价值，同时也对空气污染以及尘埃具有良好的吸附能力。因此，其种植的范围也比较广泛，但是在柳树成长过程中容易受到各种病虫害的影响，而导致其生长质量受到影响[4]。其中主要虫害有柳蓝叶甲、柳毒蛾、光肩星天牛等，近年来柳蓝叶甲危害较大，严重影响柳树的生长和观赏效果[5-7]。柳蓝叶甲[Plagioderaversicolora(Laicharting)]，又名柳圆叶甲，属鞘翅目，叶甲科[8]。柳蓝叶甲是危害杨树、柳树等杨柳科树种叶部及嫩梢的主要害虫之一。它的分布范围特别广，在我国东北、河北、浙江、云南等省份以及日本、欧洲等国家均有了它的踪迹。柳蓝叶甲成虫和幼虫均取食叶片，成虫沿叶缘取食，咬食叶片成缺刻或孔洞；幼虫仅取食叶肉，叶片被危害后，残留网状叶脉，致使叶片常卷曲变褐而枯死，严重影响林木的生长。尤其对幼苗危害严重，蓝叶甲主要取食树苗主梢和枝条顶部3～5片嫩叶，大发生时可将整株叶片的叶肉吃光，使植株失去园林观赏价值，造成非常严重的经济损失[9]。目前，防治措施仍处于化学防治阶段，对环境污染较大。各个虫期和各代的重叠发生，虫口密度不断增加,在每年7月中旬至8月上中旬达到危害高峰,从而导致除虫效果不理想、容易反复、费时费力。因此，如何安全有效地预防和控制柳蓝叶甲的危害成为亟待解决的问题。南京林业大学林木遗传与生物技术实验室在野外调查中发现1种柳树——三蕊柳，在野外极少受到柳蓝叶甲的危害，表现出了较强的抗虫性，但其与抗虫相关的代谢产物尚不明确。本试验以三蕊柳、黄花柳、垂柳、白柳、蒿柳、红皮柳6种不同的柳树品种作为试验材料，并且把柳蓝叶甲作为研究对象，研究测定不同柳树对柳蓝叶甲的抗性表现，筛选出具有优良抗性的品种，并测定其主要的差异次生代谢产物，以期为培育抗虫性强且具有优良性状的柳树良种提供参考依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 选取河北农业大学实验苗圃的6种柳树作为研究对象，分别为三蕊柳(SalixtriandraL.)、黄花柳(SalixcapreaL.)、垂柳(SalixbabylonicaL.)、白柳(SalixalbaL.)、蒿柳(Salixviminalisvar.viminalis)、红皮柳(Salixpurpurea)。 将试验材料分为非抗虫组(黄花柳、垂柳、白柳、蒿柳、红皮柳)与抗虫组(3个不同的三蕊柳无性系)作为非靶向代谢组试验材料。 1.2 试验方法 1.2.1 田间调查方法 调查地点在露天自然情况下的试验苗圃中，三蕊柳、蒿柳、垂柳、红皮柳、黄花柳、白柳6种柳树均为2 a生幼苗。采用简单随机抽样法(去除具有边缘效应的苗木)，各品种随机选择30株，做好标记。分别调查每株苗木上的受害叶片数量、总叶片数量及每百片叶片上的成虫数量、幼虫数量并记录。 1.2.2 室内试验方法 室内成虫试验方法 选择培养皿进行培养，在培养皿底部放入湿润的滤纸，每个供试品种上摘取若干完整嫩叶并且测量叶面积后，用浸湿的脱脂棉包裹叶柄以防止叶片失水，再置于培养皿中，每个培养皿中接入10只柳蓝叶甲成虫，用保鲜膜封盖并在保鲜膜上扎一些小孔，每个柳树品种均设3组重复，并做好标记。在试验过程中始终保持自然光照，避免太阳光直射,每隔1 d更换新鲜叶片，将更换下来的叶片进行扫描后使用LAMINA软件分析叶片取食面积，15 d后观察柳蓝叶甲存活数量并计算存活率。 室内幼虫试验方法 采集虫卵置于室内孵化后，选择培养皿进行培养，在培养皿底部放入湿润的滤纸，每个供试品种上摘取若干完整嫩叶并且测量叶面积后，用浸湿的脱脂棉包裹叶柄以防止叶片失水，再置于培养皿中，每个培养皿中接入大小相同的20只柳蓝叶甲幼虫，用保鲜膜封盖并在保鲜膜上扎一些小孔，每个柳树品种均设3组重复，并做好标记。在试验过程中始终保持自然光照，避免太阳光直射每隔1 d更换新鲜叶片，测量叶片食用前和食用后的叶片面积，待化蛹后观察幼虫存活数量并计算存活率。 1.2.3 植物高通量非靶向代谢组 根据对6种试验材料的抗虫性鉴定结果将非靶向代谢组试验材料分为非抗虫组(黄花柳、垂柳、白柳、蒿柳、红皮柳)和抗虫组(3个不同的三蕊柳无性系)，将参试材料送至北京百迈客生物科技有限公司(Biomarker Techno