FV3000激光扫描共聚焦显微镜的管理.docx

? ? FV3000激光扫描共聚焦显微镜的管理 ? ? 王亚琴 （浙江大学农业与生物技术学院 水稻生物学国家重点实验室，浙江杭州 310058） 0 引言 FV3000 是一款高速、高灵敏度、高精确性，可实现从宏观到微观全面观察成像的全新一代活细胞成像工具，是目前市场上应用较为普遍的一款激光扫描共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy，LSCM），也是浙江大学水稻生物学国家重点实验室（以下简称水稻重点实验室）新引进的一台大型设备。由于它具有超分辨率成像和层析成像能力，相比一般显微镜，激光扫描共聚焦显微镜具有不可比拟的优越性，已经成为现代科学技术研究领域中的大型综合仪器。 随着高校开展前沿学科、交叉学科、学科群的建设，对仪器设备的使用及管理提出了更多的需求。大型设备的投入及运行对培养学生的创新能力，提高科研水平起着重要作用，同时也是衡量学院学科建设和科研水平的重要指标[1]。LSCM 作为大型仪器的一员，其本身价格昂贵、操作复杂、耗材消耗较大，使用及维护成本较高。为贯彻落实《国务院关于国家重大科研基础设施和大型科研仪器向社会开放的意见》（国发〔2014〕70 号）精神，优化资源配置，释放服务潜能，提高使用效率[2]，水稻重点实验室依托浙江省科技创新云服务平台，国有资产管理云服务平台，将FV3000 主动对接国家平台，并配置专业技术人员操作管理，实行开放共享。本文结合多年使用和管理经验，对FV3000激光扫描共聚焦显微镜的使用及规范管理进行总结，以期为相关的管理人员和使用者提供借鉴参考。 1 激光扫描共聚焦显微镜简介 共聚焦显微术（Confocal Microscopy）概念是20 世纪50 年代中期，由哈佛大学的Marvin Minsky 博士提出，并于1957 年申请技术专利，随后多名学者对共焦成像开展了更为细致的研究，但受限于激光及计算机等技术发展水平的制约，直到20 世纪70 年代才研制出第一台真正实用的共聚焦显微镜，80 年代中期才出现第一台激光扫描共聚焦显微镜。 LSCM 是一种典型的高技术光电仪器，它主要是把荧光显微镜、激光扫描及计算机图像处理等装置组合在一起，通过有效阻止非焦平面信息的干扰，提高扫描图像的分辨率和对比度，最终获得比较清晰的图像。同时，通过连续切片操作，三维图像的扫描和重构，获得样品的整体信息。另外，LSCM 可以定量分析细胞内的特定物质和信号，同时定位不同的成分[3]。作为一种技术含量较高的研究工具，LSCM 可以对样品进行定性、定量、定位和定时研究，由于这些强大的技术功能，目前，LSCM 在分子生物学、免疫学、遗传学、药理学、病理学、食品科学、材料科学等研究领域得到广泛应用[4]。 2 FV3000 的主要用途 FV3000 具有完成活细胞和组织成像所需的高灵敏度和高速度，可以为细胞、组织和较小的生物体完成2D 到6D（x，y，z，t，λ，p）的从宏观到微观的成像操作，同时具备直观且可以调整的用户界面，支持从图像采集到图像处理和分析的整个工作流程，其主要用途有： （1）用于组织切片、生物材料荧光标记、活细胞荧光标记的高分辨率成像，同时得到清晰锐利的多层Z 平面结构的光学切片，用于构建标本三维实体结构，并做形态分析和三维空间测量。 （2）用于活细胞生物分子、细胞器或离子等生物物质的定性、定量、定时和定位分布检测等，适合用于快速变化样品，捕捉变化过程信号，可监测细胞内钠、镁、钙离子浓度变化，捕捉钙火花，并且缩短实验时间，降低光毒性。 （3）用于获取图像的时间信息，研究荧光标本随时间浓度、强度、扩散速度、空间移动等变化的数据信息，进行相关动力学研究。 （4）可对样本进行光谱扫描，获取荧光标本光谱信息，研究荧光材料光谱特性、获取未知染料发射光谱图。 3 FV3000 的组成和技术参数 3.1 激光照射系统 激光照射系统包括紫色固体激光器：405 nm；青色固体激光器：445 nm；蓝色固体激光器：488 nm；蓝绿色固体激光器：514 nm；绿色固体激光器：561 nm；红色固体激光器：640 nm。开放式和一体化的激光耦合器，通过单独一根高透过率光纤导出，近紫外到红光区域一体化色差校正，无须调节光纤中心。 3.2 共聚焦扫描检测系统 共聚焦扫描检测系统包括4 个独立的光谱型荧光检测通道和荧光检测器；1 个透射DIC 检测通道，所有通道可以独立设置不同激光；2 个大靶面制冷型超高灵敏检测器。 3.3 全自动倒置显微镜系统 全自动倒置显微镜系统包括8 孔电动激发块转盘，包含窄带带通紫外激发（UV）、窄带带通蓝光激发（B）和宽带绿光激发（G）3种；8 孔电动万能聚光镜，可适用物镜1.25～100 倍；130 W 超高压汞灯，无限远校正光学系统，齐焦距离为国际标