不同品种红肉柚类胡萝卜素组分及其抗氧化能力研究.docxVIP

? ? 不同品种红肉柚类胡萝卜素组分及其抗氧化能力研究 ? ? 罗怿，李金强，李文云，王小柯，解璞 （贵州省农业科学院果树科学研究所，贵州 贵阳 550006） 柑橘果实品质分为外观品质和内在品质，外观品质包括大小、形状、色泽等。内在品质主要指糖酸含量、出汁率、可溶性固形物含量等。类胡萝卜素的种类与含量不仅决定柑橘果实的外观品质，也影响其营养品质和保健功能[1-2]。柑橘果实中含有丰富的类胡萝卜素，因其在400 nm～500 nm内有强光吸收能力，使果实呈红色、橙色和黄色等色泽[3]。类胡萝卜素由于含有较多的共轭双键，具有抗氧化、降低癌症发病率和抗慢性疾病等功效[4]。 柑橘类果实主要呈色色素为类胡萝卜素和花青素[5]，其类胡萝卜素种类约190种[6]，在果实中主要积累叶黄素，包括玉米黄素，β-隐黄质等种类[7]。果皮是类胡萝卜素积累的主要部位，通常果皮比果肉类胡萝卜素含量高2.5倍～15倍[8]。研究显示，不同种类柑橘果实成熟时类胡萝卜素呈现偏好性积累，不论果皮还是果肉中类胡萝卜素含量均是橘类最高，柑类高于杂柑类，柚类最低的规律[9-10]。类胡萝卜素在柚果实成熟时呈现出不同的颜色，果肉颜色从琯溪蜜柚的白色到葡萄柚的紫红色，颜色的差异除了与类胡萝卜素含量的不同有关[11]，还与各种类胡萝卜素占比不同有关，已证实番茄红素是呈红色的主要色素，β-胡萝卜素、玉米黄质和叶黄素是呈黄色的主要色素[12]。在目前已知的柚种质资源中，除了紫皮柚的果皮检测出花青苷，大多数柚类都是依靠类胡萝卜素呈色[13]。红肉“琯溪蜜柚”的外果皮、海绵层及果肉因番茄红素含量高[14]而显红色，“红绵蜜柚”和“三红蜜柚”果实中的呈色色素主要为番茄红素与β-胡萝卜素[15]，而黄肉“黄金蜜柚”果肉呈色成分主要为β-胡萝卜素[16]。目前，柑橘主要类胡萝卜素相关的研究主要集中于甜橙和宽皮柑橘等品种，对柚类果实中类胡萝卜素的积累特征和机制还需进一步研究。 贵州地方柚资源丰富，已有研究发现“红香柚”、“利王柚”和“印江红橙”等红肉品种，均具有果形较小、脆嫩化渣、高抗病性等优点[17]，其成熟果肉呈红色、粉红色和橙色等颜色，海绵层呈深浅不同粉红色，但并未明确其中的主要色素。为确定石阡红橙、德江红橙、红香柚、印江红橙、利王柚以及思南红橙6个品种的果肉所含类胡萝卜素主要种类和含量，本研究运用液相色谱串联质谱对果肉中的类胡萝卜素种类和含量进行定性定量分析，探究其显色特征，同时对总酚和总类黄酮等活性成分[18]进行测定，结合铁离子还原/抗氧化能力（ferric reducing antioxidant power，FRAP）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）抗氧化能力、羟基自由基清除能力3种体外抗氧化能力测定方法，对果肉的活性成分及抗氧化能力进行综合比较分析，以期为贵州地方柚资源的果实品质评价和利用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 材料与试剂 柚果肉样品：供试柚果肉共6份，分别为石阡红橙、德江红橙、红香柚、印江红橙、思南红橙和利王柚。采自贵州省6个乡镇，均于成熟期采摘。 甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、甲基叔丁基醚、二丁基羟基甲苯（butylated hydroxy toluene，BHT）抗氧化剂（均为色谱纯）：德国Merck公司；标准品α-胡萝卜素、花药黄质、番茄红素、玉米黄质、紫黄质、γ-胡萝卜素、新黄质、β-胡萝卜素、叶黄素、β-隐黄质、虾青素、β-阿朴胡萝卜素醛、六氢番茄红素、辣椒红素、八氢番茄红素、ε-胡萝卜素、橙皮苷（均为色谱纯）：美国Sigma-Aldrich公司；没食子酸、福林酚试剂、碳酸钠、氢氧化钠、柠檬酸、二甘醇（均为分析纯）：成都市科龙化工试剂厂；总抗氧化能力试剂盒：江苏科铭生物技术有限公司。 1.2 仪器与设备 MM 400研磨仪：弗尔德（上海）仪器设备有限公司；SHIMADZU CBM 30A超高效液相色谱：日本岛津公司；6500 Quadrupole Trap质谱仪：美国应用生物系统公司；ML204型万分之一天平：瑞士梅特勒托利多公司；SpectraMax 190全波长酶标仪：美国Molecular Devices公司；T6新世纪紫外可见分光光度计：华威科创（武汉）科技有限公司；DW-HL538超低温冰箱：中科美菱低温科技股份有限公司；KQ5200DE超声清洗器：昆山市超声仪器有限公司。 1.3 试验方法 1.3.1 果肉样品处理方法 在柚果实成熟期进行取样，每个品种选取3棵树，每棵树各取3个整果，果肉分离混合后液氮冷冻，保存于-80℃超低温冰箱。 1.3.2 液相色谱串联质谱测定果肉类胡萝卜素含量 1.3.2.1 果肉类胡萝卜素的提取 取出超低温保存的冻干果肉，研磨至粉