对羟基苯甲酸酯的HPLC分析演示文稿.pptVIP

HPLC分析实验 HPLC分析实验 对羟基苯甲酸酯的HPLC分析演示文稿 * HPLC分析实验 * 当前第1页\共有34页\编于星期五\19点 对羟基苯甲酸酯的HPLC分析 当前第2页\共有34页\编于星期五\19点 二、HPLC 简介 1967年，高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography，HPLC)正式问世。 高压：流动相为液体，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压，300～600×105 Pa。 高速：分析速度快、通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。 高灵敏度：紫外检测器可达10-9g／mL，荧光检测器可达 　10-11g ／mL 。 当前第3页\共有34页\编于星期五\19点 * HPLC应用广泛 由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性，特适于非挥发性和热不稳定组分的分析，因此，在医药、食品、农业、生命科学、化工、环保等领域都有着广泛的应用。 如氨基酸、蛋白质、核酸、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。 各种HPLC方法的应用范围及对象 当前第4页\共有34页\编于星期五\19点 * 液相色谱（HPLC） 气相色谱（GC） 相同点 色谱柱可反复使用，分离效能高，高灵敏度，进样量小，分析速度快，使用范围广 分析对象 高沸点、不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品 气体、沸点较低、热稳定性好的化合物 流动相 不同极性的液体（有一定亲和作用） 惰性气体（无亲和性，只起运载作用） 温度 一般室温 较高 检测器 紫外吸收检测器（光电二极管阵列检测器），荧光检测器，电化学检测器，蒸发光散射检测器，质谱检测器，示差折光检测器 氢火焰离子化检测器（FID），热导检测器（TCD)，氮磷检测器（NPD），火焰光度检测器（FPD），电子捕获检测器（ECD)等类 HPLC与GC的比较 当前第5页\共有34页\编于星期五\19点 Agilent 1100仪器结构图 手执控制器 检测器 柱温箱 自动进样器 泵 脱气机 溶剂柜 三、Agilent-1100 液相色谱仪 高压输液系统：单元、双元、 四元泵 进样系统：手动、自动 分离系统：C18、C8色谱柱 检测系统：检测器 当前第6页\共有34页\编于星期五\19点 * 1、高压输液系统 储液器： 0.5L～2L的玻璃瓶（白色、棕色）。 脱气装置： 将气体从溶剂中除去，离线脱气和在线真空脱气。 高压输液泵： 恒压泵、恒流泵 恒流泵使用最广泛，有单活塞和双活塞往复泵。 流量准确、可调，流速为0.5～2 mL/min，泵最大流量范围为5～10mL/min（排气泡）。 当前第7页\共有34页\编于星期五\19点 流动相 HPLC 级溶剂 水为超纯水 过滤 (最大0.45 μm, 0.2 μm最好) 脱气，尤其在低流速时 相溶 当前第8页\共有34页\编于星期五\19点 * 液相色谱手动进样器 2、进样系统 当前第9页\共有34页\编于星期五\19点 * 准备时，流动相直接进柱，进样口1与定量管连接，样品充满定量管后，多余样品从2流出。 进样时，泵将流动相压入定量管，将样品全部携带进入色谱柱分析。 当前第10页\共有34页\编于星期五\19点 注射器 * 气相色谱注射器的针头为尖，液相色谱的注射器针头为平，两者不能混用。 当前第11页\共有34页\编于星期五\19点 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长１0 ～30 cm，固定相粒径 5 ～10μm 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 色谱柱 3、色谱柱 当前第12页\共有34页\编于星期五\19点 反相柱------固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。 当前第13页\共有34页\编于星期五\19点 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2）和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。 * 当前第14页\共有34页\编于星期五\19点 手性色谱柱--