不同剂量果王素对肺纤维化小鼠肺间质细胞FGF及VEGF表达水平的影响对比.docxVIP

? ? 不同剂量果王素对肺纤维化小鼠肺间质细胞FGF及VEGF表达水平的影响对比 ? ? 陈荟婷 贺兼斌 【Key】果王素;肺纤维化;碱性成纤维细胞生长因子;血管内皮生长因子 肺纤维化是一种具有相似病理过程的一类弥漫性肺间质疾病的总称，其病理过程中相对复杂，早期病理特征为弥漫性肺泡炎和肺泡结构破坏，增加呼吸衰竭、死亡率[1]。泼尼松是肺纤维化中常用的治疗方法，虽然能获得预期的效果，但是药物副作用较大，停药后复发率亦相对较高，导致临床使用受到限制。果王素为猕猴桃果仁经临界CO2萃取法提取的果仁油，主要成分为α-亚麻酸，含有一定量的维生素E和微量元素硒等，能发挥抗氧化、抗癌、保护正常细胞活性作用[2]。但是，果王素药物剂量及对肺纤维化小鼠肺间质细胞碱性成纤维细胞生长因子（FGF）及血管内皮生长因子（VEGF）的影响研究较少[3]。因此，本研究以8周龄SPF级小鼠作为对象，探讨不同剂量果王素对肺纤维化小鼠肺间质细胞FGF及VEGF的表达水平的影响，报道如下。 1 资料与方法 1.1 动物资料 购置SPF级小鼠128只作为对象，随机取8只，设为A组;剩余小鼠建立肺纤维化动物模型，建模成功后随机分为B组（24只）、C组（24只）、D组（24只）、E组（24只）、F组（24只）。128只SPF级雄性小鼠，体质量（210±15）g，清洁级。动物合格证号：SCXK（湘）2019-0014，将购置的小鼠均放置在医院动物房进行7 d适应性喂养。且对小鼠进行喂养、12 h交替光照。 1.2 仪器与设备 紫外分光光度计，型号：UV1700，购自于Pharmaspec，ShiMDAzu公司;石蜡包埋机购自武汉俊杰电子有限公司;病理切片机购自于上海徕卡仪器有限公司;显微镜购自于日本NiKon公司;TGL-16台式离心机购自于上海医用分析仪器厂;HE染色液购自于上海经科化学科技有限公司;泼尼松购自于广东邦民制药厂有限公司（国药准字;中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸，购自于湘西老爹生物有限公司，为黄色油性液体，非饱和脂肪酸含量为600 g/L。 1.3 方法 （1）建模方法。128只小鼠随机取8只为A组，剩余120只小鼠采用注入博来霉素A5建立肺纤维化小鼠动物模型。建模小鼠均给予2%戊巴比妥钠45 mg/kg腹腔注射麻醉，并在无菌操作下正中下切开，充分暴露气管，行气管切管，并向气管内注入一次性博来霉素A5注射液，剂量5 mg/kg，直立小鼠并旋转，使得药液在肺内均匀分布，从而完成肺纤维化动物模型;A组则在气管内一次性注入相同体积0.9%氯化钠;（2）药物干预方法。各组小鼠于建模后第二天开始给药，A组、B组每天给予0.9%氯化钠2 mL灌胃1次，C组给予5 mg/kg醋酸泼尼松片溶于生理盐水中，2 mL灌胃;D组取果王素60 mg/ kg混合0.9%氯化钠注射液2 mL灌胃1次;E组取果王素120 mg/ kg混合0.9%氯化钠注射液2 mL灌胃1次;F组取果王素180 mg/kg混合0.9%氯化钠注射液2 mL灌胃1次，每天1次，连续用药28 d。 1.4 观察指标 （1）HE染色。6组均完成28 d干预，干预完毕后以断颈方式处死，取肺部病灶组织。经梯度酒精脱水后进行石蜡包埋，制备4 μm切片，中性树胶封片后，倒置显微镜下观察甲状腺的病理形态[4];（2）FGF、VEGF mRNA水平。各组小鼠于干预后7 d、14 d及28 d以断颈方式处死，取劲动脉血，并采用实时荧光PCR法测定各组小鼠FGF、VEGF mRNA水平，有关操作严格遵循试剂盒说明书完成[5]。采用Western Blot检测各组肺组织中FGF、VEGF 蛋白质的动态表达。 1.5 统计学分析 采用SPSS 24.0软件处理，计数资料行χ2检验，采用[n（%）]表示，计量资料行t检验，采用（x—±s）表示，P0.05差异有统计学意义。 2 结果 2.1 HE染色结果比较 各组小鼠均完成相应的处理，并完成HE染色，结果表明：对照组小鼠肺组织中未见肺泡炎、纤维化病变，肺泡结构清晰;模型组可见大量炎症细胞、肺泡间隔增宽，成纤维细胞大量增生并广泛纤维化;不同剂量果王素小鼠肺纤维化程度明显减轻，且高剂量与泼尼松小鼠改善最佳，见图1。 2.2 FGF、VEGF mRNA水平及蛋白比较 各组小鼠均给予相应的措施处理，并完成FGF、VEGF mRNA水平测定，结果表明：随着时间的延长不同剂量果王素组与泼尼松组FGF、VEGF mRNA水平呈下降趋势，不同时间点FGF、VEGF mRNA水平比较具有统计意义（P0.05）;F组和C组FGF、VEGF mRNA水平无统计意义（P0.05）;F组FGF、VEGF mRNA水平均低于D组和E组（P0.05），见图2。 Western Blot检测