《遗传学》课件-第8章细胞周期与生长发育调控.pptxVIP

第八章细胞周期与生长发育调控;G0期复活;RNA和蛋白合成是连续进行的， 但DNA的合成只发生在S期;期;从增殖的角度，可将高等动物的细胞分为三类： ①连续分裂细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。 ②休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝、肾细胞等。 ③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等;一、有丝分裂;2、有丝分裂 为了便于描述人为的划分为六个时期： 间期（interphase）； 前期(prophase)；前中期(premetaphase)； 中期(metaphase)；后期(anaphase)；末期(telophase)； 其中间期包括G1期、S期和G2期，主要进行DNA复制、中心体复制、细胞体积增大等准备工作。;M期 ;细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关。通常G1期持续时间差异较大，M期最短约0.5～4.5小时。 标记有丝分裂百分率法（percentage labeled mitoses，PLM）：对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。放射标记物为3H或者14C标记的TDR(胸腺嘧啶核苷酸)。;TG1：G1期的持续时间 TG2：G2期的持续时间 TS：S期的持续时间 TM：M期的持续时间 TC：一个细胞周期的持续时间 PLM：标记的有丝分裂细胞所占的比例 TDR：胸腺嘧啶核苷，是DNA的特异前体，能被S期细胞摄入而掺进DNA中。通常使用的是3H或者14C标记的TDR。 ;测定原理： ① 待测细胞经3H-TDR标记后，所有S期细胞均被标记。 ② S期细胞经G2期才进入M期，所以一段时间内PLM=0。 ③开始出现标记M期细胞时，表示处于S期最后阶段的细胞已渡过G2期，所以从PLM=0到出现PLM的时间间隔为TG2。 ④ G2期细胞逐渐进入M期，PLM上升，到达到最高点的时候说明来自处于S最后阶段的细胞已完成M，进入G1期。所以从开始出现PLM到PLM达到最高点（≈100%）的时间间隔就是TM。 ⑤ 当PLM开始下降时，表明处于S期最初阶段的细胞也已进入M期，所以出现PLM到PLM又开始下降的一段时间等于TS。 ⑥ 从PLM出现到下一次PLM出现的时间间隔就等于TC，根据TC=TG1+TS+TG2+TM即可求出的TG1长度。 事实上由于一个细胞???体中TC和各时相不尽相同，第一个峰常达不到100%，以后的峰会发生衰减，PLM不一定会下降到零，所以实际测量时，常以 （TG2A+1/2TM）-TG2B的方式求出TM。;;细胞同步化(synchronization)是指在自然过程中发生或经人 为处理造成的细胞周期同步化。 （一）自然同步化 1、多核体：如：粘菌、疟原虫。 2、某些水生动物的受精卵：如海胆、海参、两栖类。 3、增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适 宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。;1、选择同步化 1）有丝分裂选择法：M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。 优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。 缺点：获得的细胞数量较少（分裂细胞约占1%～2%） 。 2）细胞沉降分离法： M期细胞体积大，可用离心分离。 优点：可用于任何悬浮培养的细胞。 缺点：同步化程度较低。;2、诱导同步化 1）DNA合成阻断法：选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成。常用TDR双阻断法： 在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TDR（Hela 2mol/L；CHO 7.5mol/L）。S期细胞被抑制，停在G1/S交界处。移去TDR，释放时间大于TS时，再次加入过量TDR。 优点：同步化程度高 缺点：产生非均衡生长，个别细胞体积增大。 2）中期阻断法 用秋水仙素等细胞分裂抑制剂将细胞阻断在中期。优点是无非均衡生长现象，缺点是可逆性较差。;第二节 细胞周期调控;一、细胞周期检验点（check point）; ;二、周期调控因子（regulator）;M期细胞与间期细胞融合： G1期：PCC（早熟凝集染色体）为单线状，因DNA未复制； S期： PCC为粉末状，因DNA由多个部位开始复制； G2期：PCC为双线染色体，说明DNA复制已完成；;调控因子的周期性活动控制时期之间的转换：新蛋白质的合成 和已存在蛋白质的降解。至少有三种分子活性必须存在： （1）G1期，使细胞通过起始点，进入S期； （2）S期：S期激活因子。蛋白激酶。 （3）M期：M期激酶（MPK），有两个亚基。 ;三、概念;4、1980s Timothy Hunt发现海胆的卵裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期振荡，命名为周期蛋白(cyclin A和B)。后