DB37_T 2617-2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65. 120B 46DB37山 東东省地電方标准DB37/T2617—2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法2014-10-13发布2014-11-10实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省农业厅提出。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：藤藏、赵善仓、张树秋、郭长英、邓立刚、李增梅、王磊、柳琪、赵玉华，I DB37/T 2617—2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B的高效液相色谱检测法。本标准适用于饲料中黄曲毒毒素B的测定。本方法检测限为5Hg/kg-2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB/T 6682分析实验室用水规则和试验方法3原理样品中黄曲霉毒素经溶液提取，黄曲霉毒素免疫亲和柱净化，供高效液相色谱（带荧光检测器）测定.4试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。本标准所述落液如未指明落剂，均指水落液4.1水，GB/T 6682，—级。4.2甲醇：色谱纯。4.3乙睛：色谱纯。4. 4氯化钠。4. 5甲醇+水（7+3）溶液：取70mL甲醇加30mL水，4.6柱后衍生液（0.05%碘落液）：称0.1g碘，落解于20mL甲醇，加水定容至200mL，过0.45期滤膜，4C避光保存，4.7黄曲霉毒素B标准品：纯度≥99%。4.8黄曲霉毒素B;标准储备液：用甲醇配制成1Hg/mL的标准储备液，于-4C保存，4.9黄曲霉毒素B标准工作液：准确移取适量储备液，用甲醇稀释成一系列标准工作液，现用现配。4. 10免疫亲和柱：免疫亲和柱应含有黄曲霉毒素B1的抗体。亲和柱的最大容量不小于100邮黄曲霜毒素B1。4.11滤膜：0.45m滤膜5仪器与设备5.1高效液相色谱仪，带荧光检测器和柱后衍生系统， DB37/T 2617—20145.2天平：感量0.01g。5.3高速均质机。5.4玻璃纤维滤纸。5.5凝涡混合器。5.6三角瓶：200mL。5.7玻璃注射器：10.0mlL。5. 8空气压力泵。5. 9玻璃试管：直径12m，长75m，无荧光特征。试样的制备将饲料样品用粉碎机粉碎，过0.85mm筛。7测定步薪7. 1提取称取15g（准确至0.01g）样品于200mL三角瓶（5.6）中，加入5g氯化纳（4.3），再加入甲醇+水溶液（4.4）75mL，用均质机高速援拌提取1min，定量滤纸过滤。准确移取10.0mL滤液，再加入20.0mL水稀释，摇匀，用玻璃纤维滤纸过滤，待净化。7.2净化将免疫亲和柱（4.9）连接于10.0mL玻璃注射器（5.7）下。准确移取10.0mL稀释后提取液注入注射器中，调节空气压力泵（5.8），控制试样以2mL/min~3mL/min稳定的流速过柱，然后取10mL水淋洗亲和柱，弃去全部流出液，并使2mL～3ml空气通过柱体。准确加入1.0mL甲醇（4.1）洗脱，流速为1mL/min～2ml/min，收集全部洗脱液于玻璃试管（5.9）中。用流动相定容至2ml，于凝涡混合器(5.5）上震荡1min，过0.45Hm滤膜。供液相色谱测定，7.3测定条件7. 3. 1液相色谱参考条件参考条件如下：a)色谱柱：Cl色谱柱(4.6X250m，5μm)，或相当者：b)激发波长：360nm，发射波长：430nm;c)流动相：水：甲醇：乙睛=56：22：22：d) 柱温：35℃：e)流速： 0.7 mL/min;f)进样量：10L；g)柱后衍生液：0.05%碘液：h)衍生液流速：0.3mL/min；i)反应管温度：70℃。7. 3. 2样品测定按上述仪器条件，根据保留时间定性，外标法定量。黄曲霉毒素B1标准品色谱图见图1。2 DB37/T 2617201415.00-10.00-0.002.004.006.00Mnutes8.0010.0012.0014.00图1黄曲霉毒素B1标准品色谱图结果计算按式（1）计算样品中黄曲霉毒素B1残留量，数值以毫克每千克（mg/kg）表示：0=Cs×A×V45mxAs(1)2式中:样品中黄曲霉毒素B1残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）：Cs 标准溶液中相应黄曲霉毒素B1色谱峰的浓度，单位为微克每毫升（Hg/mL）A试样溶液中相应黄曲霉毒素B1的峰面积：As标准溶液中相应黄曲霉毒素的峰面积：洗脱所用甲醇的总体积，单位为毫升（mL）：试样的质量，单位为克（g）。计算结果表示到二位有效数字，重复性在重复性条件下获得