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糖尿病大鼠皮肤损伤模型的构建 皮肤修复材料作为一种新型的皮肤修复方法，具有良好的前景。糖尿病足等难愈性创面的皮肤修复对材料的性能和有效性有更高的要求，本研究采用STZ腹腔注射建立糖尿病大鼠模型，并在其背部形成全层皮肤缺损创面，以构建糖尿病大鼠皮肤损伤模型，用于评价胶原蛋白膜、羧甲基壳聚糖止血海绵和明胶生物活性玻璃复合材料对难愈性皮肤损伤的修复作用，为相关研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 柠不同酸钠缓冲溶液的制备 柠檬酸钠缓冲溶液配制:2.10 g柠檬酸加100 m L双蒸水配成柠檬酸母液;2.94 g柠檬酸三钠加100 m L双蒸水配成柠檬酸钠母液;将柠檬酸母液和柠檬酸钠母液按1∶1.32的比例混合，调节pH至4.0～4.5，得到所需的0.1 mol/L的柠檬酸钠缓冲溶液。 STZ溶液配制:将STZ溶解于柠檬酸钠缓冲液中，配成浓度为10 mg/m L的STZ溶液，用滤菌器过滤除菌后避光保存，现用现配。 胶原蛋白膜、羧甲基壳聚糖止血海绵(杭州英健生物科技有限公司)，明胶生物活性玻璃复合敷料(上海硅健生物材料有限公司)。 1.2 实验动物 SPF级雄性SD大鼠，7～8周龄，体质量约200 g(中国食品药品检定研究院实验动物资源中心)。 1.3 实验方法 1.3.1 皮肤多次注射 SD大鼠适应性饲养7 d后随机分成5组，每组8只。禁食一晚，空腹血糖6.1 mmol/L的大鼠用于建立糖尿病大鼠模型。按照25 mg/Kg、50 mg/Kg、75 mg/Kg和100 mg/Kg的剂量腹腔注射STZ溶液，空白对照组注射柠檬酸钠缓冲溶液。每天密切观察所有试验大鼠的一般情况。注射后第7、14、21和28天尾尖采血检测非空腹血糖值。 将15只SD糖尿病大鼠随机分成3组，麻醉，备皮，于双耳连线中间向下大约8 cm处，以脊柱为中线分别切除1 cm×1 cm、2 cm×2 cm、3 cm×3 cm的正方形全层皮肤，深至肌层，用无菌纱布覆盖创面，医用胶带固定。术后动物单笼饲养，第0、5、12、21天观察创面愈合情况。 1.3.2 感官评价方法 将三种材料(胶原、羧甲基壳聚糖、明胶生物活性玻璃)剪至2 cm×2 cm大小。将80只SD糖尿病大鼠皮肤损伤模型随机分为4组:空白对照组(n=20)、胶原组(n=20)、羧甲基壳聚糖组(n=20)、生物玻璃组(n=20)。胶原组、羧甲基壳聚糖组、生物玻璃组将相应样品直接敷在皮肤缺损创面，并用无菌敷料贴覆盖;空白对照组直接用无菌敷料贴覆盖创面。术后所有大鼠均单笼饲养，每2天观察实验鼠的精神、活动和饮食变化，第3、7、14、21天打开敷料观察创伤愈合与炎症情况，拍照，作好观察记录，并在第14、21天取材进行病理切片检查。 1.4 测试指标 1.4.1 伤口的一般恢复 记录造模后第3、7、14、21天大鼠创面渗出、黏连以及创口回缩等情况，大体判断创面的恢复情况。 1.4.2 伤口愈合率 造模后第3、7、14、21天对创面进行拍照(距离和曝光方式相同)，用图像分析系统(Image Pro)测算创面愈合率。 1.4.3 皮肤组织病理学观察 造模后第14、21天，在创面上切取约1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的皮肤组织，宜包含周围正常皮肤组织，HE染色后观察各时间点各组大鼠皮肤创面的修复情况和肉芽组织生长、炎症反应等。 1.5 统计分析 以SPSS 21.0软件进行统计学分析，实验结果以 2 结果 2.1 动物非空腹血糖含量、成模率及死亡情况 注射STZ后，25 mg/Kg STZ组非空腹血糖值未到达糖尿病血糖标准(高于16.7 mmol/L)，动物精神状态良好，毛发光泽;50 mg/Kg STZ组部分大鼠非空腹血糖值16.7 mmol/L，成模率为50%;75 mg/Kg STZ组所有大鼠血糖值均16.7 mmol/L，动物精神状态差，弓背捲体，动作缓慢，毛发无光泽，成模率100%;100 mg/Kg STZ组动物注射STZ后2 d内死亡5只，4 d内全部死亡。因此，确定以75 mg/Kg STZ单次腹腔注射构建糖尿病大鼠模型(图1)。 2.2 两组患儿表皮覆盖和手术结果情况比较 1 cm×1 cm组、2 cm×2 cm组所有动物术后均活动正常，创面随时间延长而逐渐愈合。术后第5天，两组创面愈合程度无明显区别;术后第12天，1 cm×1 cm组大部分创面已被表皮覆盖，创面基本愈合，而2 cm×2 cm组仍有大部分创面未被表皮覆盖;术后第21天，1 cm×1 cm组创面已完全愈合，创面附近毛发生长良好，2 cm×2 cm组创面缩小，表皮已覆盖大部分创面，但仍有小部分未愈合。3 cm×3 cm组术后第1天动物死亡1只，术后第3天、第4天各死亡2只。因此，最终确定在大鼠背部构建2 cm×2 cm的全层皮肤损伤创面(