NY_T 3257-2018水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3257-2018水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程Technical code of practice for wounding inoculation of detached leaves forevaluation of rice resistance to the blast fungus (Magnaporthe oryzae )2018-12-01 实施2018-07-27 发布中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3257—2018言前本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、中国农业大学。本标准主要起草人：赵文生、彭友良、杨普云、杨俊、朱晓明。I NY/T 3257—2018水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程1范围本标准规定了水稻对稻瘟病抗性的室内离体叶片鉴定技术方法和评价标准。本标准适用于常规水稻资源、品种、品系等材料对稻瘟病抗性的室内鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T15790稻瘟病测报调查范围GB/T19557.7植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南水稻3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1抗病性disease resistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传的性状。3. 2 artificial inoculation人工接种在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程。3. 3抗性评价evaluation of resistance根据采用的技术标准判别植物寄主对特定病虫害反应程度和抵抗水平的描述。3. 4接种体inoculum能够侵染寄主并引起病害的病原体。3. 5水稻稻瘟病the rice blast由丝状真菌稻瘟病菌（有性态为Magnaportheoryzae，无性态为Pyricularia oryzae）引起的水稻真菌病害。依据病害发生的时期和部位，稻瘟病可分为苗瘟、叶瘟、叶枕瘟、穗颈瘟、枝梗瘟、粒瘟和茎节瘟。3.6番茄燕麦培养基oattomato agar用于稻瘟病菌培养。称取40g燕麦片，800mL水煮沸留滤液，加人150mL番茄汁、15g琼脂粉定容至1L。4病原物的采集、分离和保存4.1病样采集在待测水稻材料的适合种植地区或拟推广地区代表性地块种植普感品种丽江新团黑谷，种植全程1 NY/T3257—2018不施用杀菌剂。在田间叶瘟发生期（一般为分期至抽穗扬花期），采集具有典型稻瘟病病斑的水稻叶片。4.2病菌分离剪取含有单个典型病斑的水稻叶段，浸水展开，经次氯酸钠消毒和无菌水漂洗之后，用灭菌滤纸吸干叶段上的水，平铺于水琼脂板上。于28℃光照培养箱中约5d，可观察到稻瘟菌的无性繁殖体（包括营养菌丝、分生孢子梗和分生孢子）。在体视显微镜下，用挑针挑取叶段上的稻瘟菌分生孢子，并置于含有四环素等抗生素的水琼脂板上，28℃光照培养箱中培养。12h～24h后，用挑针在体视显微镜下挑取萌发的单个稻瘟菌分生孢子。含有单个稻瘟菌分生孢子的琼脂块要尽可能小，且背景干净、无杂质。4.3病菌培养将挑取的单个稻瘟菌分生孢子块转移至番茄燕麦培养基上，于28℃光照培养箱中培养，3d～5d后可长出稻瘟菌菌落。4.4病菌保存确认长出的稻瘟菌菌落生长良好，无杂菌污染。挑取菌落边缘的新生菌丝至贴有灭菌滤纸片的番茄燕麦培养基上，于28℃光照培养箱中培养。待稻瘟菌菌落长满滤纸片（7d～9d)，确认无杂菌污染后，收集滤纸片于灭菌的硫酸纸袋内，编号，并于超净工作台内吹干。将装有稻瘟菌的硫酸纸袋放入灭菌的信封内，于干燥器中干燥7d～10d；然后放置于盛有硅胶干燥剂的塑料盒内，于一20℃冰箱中长期保存。每个病斑只分离、保存1个单孢菌株。5水稻的种植与管理根据需要称取适量的供试（待测)水稻种子，按常规方法种植水稻幼苗，待水稻生长至3叶～7叶龄期用于接种。6接种体的制备稻瘟菌菌丝块或分生孢子悬浮液均可作为室内接种鉴定的接种体。6.1菌丝块从冰箱中取出保存的滤纸片，平铺在番茄燕麦培养基的中央部位，于28℃光照培养箱中培养。5d～7d后，用菌落边缘的菌丝块作为接种体。在番茄燕麦培养基上转接培养的菌丝块也可作为接种体。6.2分生孢子悬浮液6.2.1产孢在番茄燕麦培养基上活化稻瘟菌，待其菌落直径长至接近培养基边缘时，在超净工作台内往培养皿中加人适量无菌水润湿菌落，片刻后用无菌的涂菌环将菌丝打断成细小碎段，用移液器将菌丝液混匀，转移到新的厚番茄燕麦平板上（培养基厚度大于培养血