桥粒芯蛋白1（Dsg1）抗体检测试剂盒（ELISA） 说明书.pdfVIP

桥粒芯蛋白1 （Dsg1 ）抗体检测试剂盒（ELISA ） 说 明 书 货号：7680E 规格：48 孔 生产企业 经销企业 株式会社医学生物学研究所（MBL） 北京博尔迈生物技术有限公司 桥粒芯蛋白 1 （Dsg1 ）抗体检测试剂盒（ELISA ）说明书 - 1 - 【产品名称】 通用名称：桥粒芯蛋白1 （Dsg1 ）抗体检测试剂盒（ELISA ） 英文名称：MESACUP Desmoglein Test “Dsg 1” 【包装规格】 48人份/盒 【预期用途】 桥粒芯蛋白1 （Dsg1 ）抗体检测试剂盒（ELISA ）利用酶联免疫吸附法（ELISA ），定 性测定人类血清中的抗Dsg1抗体，用于体外诊断，作为诊断特定天疱疮的一种辅助诊断手 段。 桥粒芯蛋白1 （Dsg1 ）是一种桥粒钙粘附蛋白，表现于落叶型天疱疮（PF ）患者的复层 鳞状上皮细胞及其靶抗原。PF是一种自身免疫性大疱性皮肤病，临床表现为松弛性水疱、 糜烂痂屑，是由于角质形成细胞丧失细胞间粘附力而导致的表皮内水疱。PF患者血清中可 测出Dsg1 自身抗体（IgG ），这种抗体是水疱形成的致病物质。另一类天疱疮——寻常型天 疱疮（PV ）约60%患者血清中也可测到Dsg1抗体（IgG ）。Amagai等利用杆状病毒表达系统， 成功制成人类Dsg1 的重组体（rDsg1 ）。rDsg1被归类为一种分泌蛋白，其包含Dsg1 的全部 细胞内功能区。rDsg1能够免疫吸附PF患者血清中的致病抗体，在动物实验中能预防新生天 疱疮小鼠模型的水疱形成。这些发现表明，rDsg1在天疱疮的发病机理中即使不是天然抗原 的全部构象表位，也占据了其中的绝大多数。目前，天疱疮的最主要诊断手段是利用正常人 类皮肤或猴食道切片为底物的免疫荧光检测（IF ）。然而该方法尚存在多种缺点：（a ）需 要有经验的检测人员，抗体效价的确定主观性较强；（b ）细胞表面蛋白抗体造成假阳性结 果；（c ）相似的染色形态会使PV和PF难以区分。ELISA法利用了rDsg1作为抗原，克服了 这些问题，是一种灵敏度和特异性兼具的天疱疮检测方法。 桥粒芯蛋白1 （Dsg 1）抗体检测试剂盒（ELISA ）可高度灵敏地检测Dsg1 自身抗体（IgG ）。 【检验原理】 桥粒芯蛋白1 （Dsg1 ）抗体检测试剂盒（ELISA ）利用ELISA定性测定血清中的Dsg1抗 体。检测时，将标准液和患者血清加入涂有Dsg1抗原的微孔内，使Dsg1抗体与孔内固定的 抗原发生反应（样品孵育）。洗涤微孔板，除去未结合的血清蛋白，然后加入标记了辣根过 氧化物的人类IgG单克隆抗体，并孵育（结合孵育）。接着再次洗涤，然后加入过氧化物酶 底物，并再次反应一段时间（底物孵育），之后向每孔加入酸溶液，以终止酶反应，并稳定 显色反应。用分光光度计测定吸光度，量化检测结果。 【主要组成成分】 Dsg1微孔条带（48孔）、0U/ml标准血清1 （1.5ml的正常人血清稀释于含0.09%叠氮钠的 反应用缓冲液（标本稀释液））、100U/ml标准血清2 （1.5ml的Dsg1抗体呈阳性的人类血清， 稀释于含0.09%叠氮钠的反应缓冲液）、酶标记抗体液（二抗）（0.3ml标记辣根过氧化物的 小鼠抗人IgG抗体，浓缩液需101倍稀释）、酶标记抗体（二抗）稀释液（24ml含有HEPES 和牛血清蛋白的混合溶液），反应用缓冲液（标本稀释液）（50ml含Tris缓冲液、牛血清和 0.09%叠氮钠的混合液）、清洗缓冲液（100ml含PBS和Tween20 的浓缩液，需10倍稀释）、 酶基质液（20 ml 的3、3、,5、5- 四甲级联苯胺二氢氯化物/过氧化氢（TMB/ H O ）溶液）、 2 2 终止液（20ml 的1.0N硫酸溶液）。 【储存条件及有效期】 产品储