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牛粪菌肥制备工艺优化研究 近年来，随着中国养牛业的快速发展，大量牛粪发生了。如果处理不当，将对环境和人类健康产生重大威胁。 研究表明,将禽畜粪便进行好氧堆肥生产优质有机肥,不仅可有效解决大量禽畜粪便污染,更可良好实现禽畜粪便资源化利用及适应现代有机农业发展需求,走生态、环保、循环农业发展道路,这已被证明为现代畜牧业及现代农业有机结合的重要和行之有效的途径［1，2］。 牛粪经堆肥化处理, 发酵腐熟形成重要活性有机物质—腐殖质,不仅对作物土壤具有重要改良作用,可增加土壤有机质含量,更是其肥力元素的主要载体,为作物生长提供较充足的氮、磷、钾、钙、镁、硫、锌等各种大量及中微量元素,且稳产高产、品质优良［2，3］,因此近年来受到了广泛重视。 然而,自然堆肥腐熟周期长,且氮、磷、钾等主要肥力元素含量偏低,导致肥力效果不显著等, 极大地限制了牛粪等禽畜粪便的规模化、工业化利用。 加快堆肥腐熟进程,切实提高堆肥效率,并在此基础上进一步添加固氮、解磷、解钾等功能菌株, 大力增加作物土壤中有益功能菌株数量,切实提高腐熟有机质氮、磷、钾等主要肥力元素含量水平, 将普通堆制有机肥转变为有机功能菌肥, 是近年来对牛粪等有机废弃物进行资源化、工业化利用的主要发展方向［4，5］。 目前,国内外学者关于加快牛粪等禽畜粪便堆肥发酵及腐熟进程方面的研究成果及报道较多,对堆肥适宜碳氮比、含水量、翻堆次数、通氧量、腐熟菌剂接种量等研究较为清楚［4－6］,但对进一步制作相关功能菌肥的研究及报道较为少见。 本试验充分借鉴前人快速堆肥腐熟经验及成果, 以自制牛粪腐熟菌剂快速腐熟牛粪,并在此基础上,进一步添加固氮、解磷、解钾等功能菌株进行二次发酵,以二次发酵工艺及参数为研究重点,以期获得氮、磷、钾等主要肥力元素含量高的牛粪功能菌肥产品,为工业化利用牛粪资源及田间应用提供一定技术参数及理论依据。 1 材料和方法 1.1 几种常见药品 新鲜牛粪,棉子壳,麸皮,土豆,蛋白胨、牛肉膏、甘露醇、葡萄糖、Ca CO3、Ca3(PO4)2、Na2HPO4、 钾长石粉(K2O含量10.02%)及其他常见药品;普通摇床、高压灭菌锅、超净工作台、自制二次发酵罐(外包保温材料)及锥形瓶、培养皿等常用设备与器皿。经测定,新鲜牛粪含水率为82%,全碳27.8%,全氮1.53%,粗蛋白3.18%,粗纤维9.76%,粗脂肪0.46%,总糖7.41%,淀粉4.39%,p H 7.2;棉子壳含水率8.9%,全碳59.7%,全氮1.49%,粗蛋白4.39%,粗纤维45.6%,粗脂肪4.51%,总糖3.37%,淀粉2.44%,p H 6.2。 1.2 菌株培养基 腐熟菌株:XC1、XC4、MC1、MC2 分别为荆楚理工学院生物工程学院应用微生物技术实验室从牛粪自然堆肥中分离获得的一种芽孢杆菌(Bacillus sp.)、 假单胞菌(Pseudomonas sp.)、 木霉(Trichoder-ma sp.)及曲霉(Aspergillus sp.)［7，8］;功能菌株:采用常用菌株, 其中固氮菌为圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum), 解磷菌为巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium), 解钾菌为胶质样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)［9，10］。 菌株培养基: 牛肉蛋白胨培养基(用于菌株XC1、XC4 培养),PDA培养基(用于菌株MC1、MC4培养);阿须贝固氮培养基(甘露醇10 g,KH2PO40.2g,Mg SO4·7H2O 5.0 mg,Na Cl 0.2 g,Ca SO4·2H2O 0.1g,Ca CO35.0 g, 蒸馏水1 000 m L, p H7.2~7.4), 解磷培养基[葡萄糖10 g,(NH4)2SO40.5 g,KCl 0.3 g,Mg SO4·7H2O 0.3 g,Ca3(PO4)210 g,Fe SO4·7H2O 0.03g,Mn SO4·4H2O 0.03 g,蒸馏水1 000 m L, p H 7.0~7.5],解钾培养基(蔗糖5.0 g,Na2HPO42.0 g,Mg SO4·7H2O5.0 mg,Fe Cl35.0 mg,Ca CO30.1 g,钾长石粉1.0 g,蒸馏水1 000 m L,p H 7.0~7.5),固氮、解磷、解钾培养基分别用于固氮菌、解磷菌、解钾菌培养,以保持功能菌株的良好活性［11，12］。 1.3 水质、水量 以棉子壳为辅料,加入到新鲜牛粪中并搅拌均匀(主辅料体积比约1.0∶0.4),调节牛粪基质含水量至60%~65%,p H 7.4~7.6,C∶N约22∶1。 在平整地面以木棍作密“井”字形排列,将处理后的牛粪基质铲至木棍上建大小约2.0 m×1.5 m×1.5 m堆体,堆顶面每间隔3