西安市外来物种尖膀胱螺的生物入侵现状研究.docxVIP

? ? 西安市外来物种尖膀胱螺的生物入侵现状研究 ? ? 贺 平 王 奇 刘佳癑 刘 乐 司浩倩 匡俊喜 卫博文 （1西藏民族大学医学院，陕西咸阳 712082；2国家民委高原低氧环境与生命健康实验室，陕西咸阳 712082） 伴随着全球一体化进程的深入推进，国际交往日益频繁，外来生物入侵已成为全球性问题。腹足动物与人类的关系十分密切，许多种类可供人类食用或作为动物饵料，但是有些贝类也易成为人体寄生虫（以吸虫和线虫为主）的宿主传播疾病[1]。尖膀胱螺（Physa acuta Draparnaud 1805）是广州管圆线虫和卷棘口吸虫的中间宿主[2]，前者寄生于人中枢神经系统，是引起人体嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎的病原体，患者会出现剧烈头痛等临床症状，甚至死亡[3]；后者感染人体会出现厌食、下肢浮肿等症状，严重者可致死亡[4]。尖膀胱螺原产于北美洲，目前在世界各地广泛分布[5]。国内最早见于黑龙江和内蒙古地区，此后相继在江苏太湖[6]、北京[7]、浙江杭州[8]、湖北武汉[9]、广东深圳[10]、云南丽江和山东兖州[11]等地区陆续被发现，近期在高寒低氧的拉萨河流域也发现了该物种的踪迹[12]。种种迹象表明，尖膀胱螺的适应能力极强，在中国的分布区域不断扩大。 西安市是历史悠久的文明古都，东浐灞、北泾渭、西沣涝、南潏滈为西安市赢得“八水绕长安”的美誉，丰富的水系资源也为贝类提供了良好的栖息环境。随着“一带一路”倡议的实施和国家级西咸新区的快速发展，西安市国际交往日益频繁，增加了外来物种入侵的风险。有学者报道，尖膀胱螺已成为西安市北郊某水源地的优势种群，严重影响了当地的生物多样性[13]。为了深入了解西安市尖膀胱螺的入侵现状，客观评价其生态安全性，对西安市主要水系的贝类展开了详细调查，现总结如下。 1 材料与方法 1.1 样品采集 2018年6月至2019年6月对渭河、泾河、沣河、浐河、灞河、潏河等6条河流的淡水贝类进行了调查。因为贝类栖息环境复杂多样，所以主要根据经验选择适宜贝类生存的环境采集样品，例如水流缓慢且水深较浅的河岸浅滩和水体边缘等，每个采样点采集50 m范围内各种贝类。采样过程中，重点关注水草茎叶、石壁缝隙、枯树枝腐殖质等，详细记录采样时间、采样地点名称和GPS定位数据等。样品经无水乙醇浸泡，4℃保存备用。 1.2 试验材料 试验材料有组织基因组DNA提取试剂盒（广州美基生物科技有限公司）、DL2000 DNA Marker和PCR试剂盒（广州东盛生物科技有限公司）、琼脂糖凝胶[生工生物工程（上海）股份有限公司]。 1.3 物种鉴定方法 1.3.1 形态学鉴定。根据参考书和文献资料所描述的物种特征和图片进行形态鉴定，包括壳高、壳宽、壳口形状、螺层数、左右旋和螺纹等特征。 1.3.2 分子生物学鉴定。从每条河流随机选择一处采样点，基于形态学鉴定结果任意挑取8个尖膀胱螺样品，用Kimble微量研磨器将肉足研碎，按照试剂盒 Hipure Tissue DNA Kit（Magen）说明书提取组织DNA。以cox1为分子标志物进行鉴定，用Primer 5.0软件根据GenBank中尖膀胱螺cox1（FJ373016.1）序列设计引物，上游 F：5′-TTGGGATCTGGTGTGGATT G-3′，下游 R：5′-CCTCTTGGGTCATAGAACCT-3′。PCR扩增条件为95℃预变性4 min，然后进行35个循环，每个循环包括95℃预变性45 s、52℃退火40 s、72℃延伸45 s，循环结束后72℃延伸10 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后送擎科生物技术公司进行测序，测序结果在NCBI网站利用BLAST进行核酸序列相似性比对分析，并基于cox1序列构建进化树。 2 结果与分析 2.1 尖膀胱螺分布情况 经实地调查，所有被调查的河流均有尖膀胱螺分布，虽然部分河段因为河道改造、雨季洪水冲刷或者实际分布数量较少等原因未采集到样品，但是调查数据初步表明，该物种在所调查的河流均有滋生。累计调查了渭河、泾河、沣河、浐河、灞河、潏河等6条河流的17个采样点，其中11个采样点发现了尖膀胱螺，大部分采样点同时存在其他贝类共同栖息，以萝卜螺多见，其次为中华圆田螺（表1）。 表1 样品采集信息 2.2 形态学鉴定 如图1所示，螺壳呈长卵圆形，长度10.64 mm，表面光滑，螺壳呈左旋，有4个螺层。壳口较大，呈长椭圆形，壳口无厣。活体尖膀胱螺有一对尖而细长的触角，触角基部内侧有一对眼睛，肉足狭长。上述形态特征与尖膀胱螺有关报道一致[8，10]。 2.3 分子生物学鉴定 如图2所示，目的片段核苷酸序列长约550 bp，测序结果与GenBank中收录的多条Physa acuta cox1基因序列的相似度为99.45%～99.63