DB37T 3625-2019牛羊养殖场气溶胶布鲁氏菌荧光定量PCR鉴别检测技术规程.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3625—2019 牛羊养殖场气溶胶布鲁氏菌荧光定量PCR 鉴别检测技术规程 Differential detection of Brucella pathogenic organisms in aerosol of cattle and sheep farm by Real-time PCR 2019 - 07 - 23 发布 2019 - 08 - 23 实施 山东省市场监督管理局 发 布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语与定义 1 4 缩略语 1 5 原理 1 6 材料及设备 1 6.1 试剂 1 6.2 仪器设备 2 7 生物安全措施 2 8 气溶胶样品的采集、保存及运输 2 8.1 气溶胶样品的采集 2 8.2 气溶胶样品的采集后的灭活处理 2 8.3 样品的保存和运输 2 9 操作方法 2 9.1 气溶胶样本的前处理 2 9.2 核酸提取 3 9.3 荧光定量PCR 检测 3 10 分析条件设定和结果判定 3 10.1 阈值设定 3 10.2 质控 3 10.3 结果分析及判定 3 11 注意事项 4 附 录 A （资料性附录）主要仪器设备 5 附 录 B （规范性附录）牛羊养殖场环境气溶胶样本的采集方法和注意事项 6 附 录 C （资料性附录）气溶胶布鲁氏菌核酸荧光定量PCR 鉴别诊断结果图 8 附 录 D （规范性附录）检测过程防止交叉污染的措施 11 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农业科学院奶牛研究中心、山东师范大学。 本标准主要起草人：何洪彬、赵贵民、王洪梅、侯佩莉、马文青、何成强、程凯慧、杨宏军、张亮、 解晓莉。 牛羊养殖场气溶胶布鲁氏菌荧光定量PCR 鉴别检测技术规程 1 范围 本标准规定了牛羊养殖场环境气溶胶样本中布鲁氏菌核酸荧光定量PCR鉴别诊断方法。 本标准适用牛羊养殖场环境中气溶胶布鲁氏菌核酸的检测以及牛种、羊种和猪种布鲁氏菌核酸的鉴 别检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 Ct值 Cycle Threshold 荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AGI：全玻璃液体冲击式采样器（All-Glass-Impinger） 5 原理 本标准采用SYBR Green I染料实时荧光定量PCR技术。 布鲁氏菌IS711 （Insertion Sequence 711，IS711）插入序列在不同种的布鲁氏菌基因组中高度保 守，仅在拷贝数上存在差异。一条引物锚定在IS711上，另一条引物分别选在不同种布鲁氏菌IS711插入 序列邻近的上下游单染色体DNA上，可以用来鉴别布鲁氏菌种的特异性。 6 材料及设备 6.1 试剂 6.1.1 试剂级别 检测中使用