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五氯酚钠对小鼠骨髓细胞微核的影响 氯酚钠是一种广泛使用的有机氯农药。在世界范围内，中国经常使用二氯酚钠来控制日本吸血性疾病的流行，并取得了明显的效果。五氯酚钠具有良好的流动性，但由于自然界的分解缓慢、长期使用，尤其是滥用，造成了环境破坏。在中国长江中下游的11个省份、市、自治区，它被用于杀死指甲，并对环境造成了长期污染。近年来，随着对五氯酚钠毒性的深入研究，人们注意到它可以抑制生物代谢过程中氧化磷酸化的影响，并对肝脏、肾脏和中枢神经系统产生特别敏感的影响。许多国家严格限制了使用五氯酚钠的范围，但在中国，高效五氯酚钠的使用也被广泛应用于池塘的消毒。因此，对环境和生物环境的反应以及生物毒性的机制和潜在遗传毒性的影响对环境保护和人类健康非常重要。它也是环境科学和生物科学活动的热点之一。 近年来国内外对五氯酚钠的研究多集中在对动物尤其是水生生物的毒性. 如Gagnon发现五氯酚钠对幼年红鲷鱼有潜在的改变肝脏需氧厌氧代谢的作用;Florence等发现五氯酚钠能够通过增加感染的敏感性来影响海洋贝类的免疫系统;施玮等发现五氯酚钠对发光细菌的EC50值随着pH 值和硬度的增加而增加,与水体中相同浓度的常规有机污染物相比,五氯酚钠表现出更强的毒性. 但是,五氯酚钠对于植物的致突变性则未见报道,也并未见对鱼类早期生命阶段的毒性研究,不能全面评价五氯酚钠在生态系统中的毒性. 五氯酚钠可能存在一定的遗传毒性,但是目前对五氯酚钠遗传毒性研究的观点不一. 为了较全面评价五氯酚钠的致突变性,本文采用不同生物材料(小鼠骨髓细胞、蚕豆根尖细胞和斑马鱼胚胎),在不同生物水平上(细胞水平和胚胎水平),观察了五氯酚钠对小鼠骨髓细胞微核率、蚕豆根尖微核率和斑马鱼胚胎发育的影响. 1 材料和方法 1.1 试验材料 1.1.1 试验药物 五氯酚钠(sodium pentachlorophenate),纯度99%,中国环境科学研究院提供. 1.1.2 .松滋青皮豆和斑马鱼 昆明种小鼠,体重18-22g,由南京医科大学实验动物中心提供. 松滋青皮豆(Vicia faba),由华中师范大学生命科学院提供. 斑马鱼(Brachydanio rerio),购于南京市花鸟市场. 1.2 测试方法 1.1.1 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 根据文献进行.不同剂量组的五氯酚钠给药2次,给药间隔24 h,末次给药6 h后,断颈处死小鼠,按照常规方法制成骨髓涂片,吖啶橙(AO)染色,另设环磷酰胺阳性对照. 在荧光显微镜下观察计数,每组5只小鼠,每只小鼠观察1 000个嗜多染红细胞(PCE),计算出有微核的嗜多染红细胞(MNPCE ‰),并进行统计分析. 不设重复实验. 1.1.2 改变剂对蚕根尖微核试验. 按照文献进行.蚕豆经过浸种催芽后,各剂量组取生长良好的蚕豆进行根尖染毒,同时设置阴性对照(自来水)和阳性对照(环磷酰胺). 染毒结束后,蚕豆经过根尖细胞恢复培养、根尖细胞固定、孚尔根(Feulgen)染色、制片,最后进行镜检. 每个处理观察5个根尖,每个根尖观察1000个细胞,计算微核千分率(MCN‰),并进行统计分析. 不设重复实验. 1.1.3 斑马鱼胚胎发育 试验根据OECD(1998)标准方法进行.斑马鱼见光后即刻进行交配,给光30 min后马上收集鱼卵,将其迅速暴露于受试溶液中并转移至多孔培养皿中,每个浓度40个卵. 迅速用倒置光学显微镜甄别受精卵与未受精卵,剔除未受精卵、分裂时呈明显的不规则或是卵壳损伤的卵,及时补充健康受精卵. 将多孔培养皿放置在恒温光照培养箱中,培养温度为(25±1)℃,光照比为14 h∶10 h (昼/夜),进行斑马鱼胚胎发育培养. 用倒置显微镜观察受精卵的4、8、12、24、36、48、72 h发育情况,记录发育过程中出现的一些具有代表性的毒理学终点和各种其他异常现象. 本试验重复两次. 2 结果 2.1 g对小鼠骨髓细胞微核试验的影响 实验结果见表1. 结果表明,除25 mg/kg剂量组外,各个剂量组均能不同程度增加小鼠骨髓细胞的微核率,和对照组相比存在显著性差异(P0.05),并存在一定的剂量-效应关系. 2.2 改小鼠根尖细胞微核试验 实验结果见表2. 结果表明,各个剂量组均能不同程度增加蚕豆根尖细胞的微核率,最高剂量组5.0mg/L和对照组相比存在显著性差异(P0.01),且存在一定的剂量-效应关系. 2.3 tsk软件致畸作用分析 实验结果见表3. 结果表明:25 ℃时五氯酚钠对斑马鱼胚胎发育有明显的致畸作用,由TSK软件可算出72hEC50为515.3 μg/L,95%置信区间为513.1-517.6 μg/L. 可以看出异常率随暴露时间的延长和暴露剂量的增加表现出增大趋势. 3 氯酚钠对斑马鱼胚胎发育的致突变性和致突变性的作用 魏雪涛等观