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愈伤组织诱导分化及内源激素的影响 植物内源素是植物体内的一种天然化合物。虽然含量很低，但与植物生长发育密切相关，并影响植物生命活动的整个过程。在植物愈伤组织培养中,外源激素起着传递遗传物质的脱分化、再分化等发育信号的作用,而外源激素的作用效果与外植体以及愈伤组织本身内源激素的种类和水平有密切关系,外源激素必须通过内源激素才能发挥其作用。只有将各种外源激素合理使用,才能适应外植体对激素的特定要求,充分发挥激素的调节作用,诱导愈伤组织的产生并达到分化。而掌握内外源激素在愈伤组织培养中的水平及其相互作用关系,对于在一定程度上减少外源激素添加的盲目性,指导植物愈伤组织培养具有重要的意义。 1 外源素对植物组织培养的影响 1.1 na4-d诱导愈伤组织的诱导 在大多数情况下,只用生长素2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D就可成功地诱导外植体产生愈伤组织,其使用范围为0.001~10mg/L。但在只含2,4-D的诱导培养基上生长的愈伤组织比较松软,呈黏液化和泡状,一般不易分化,且再生频率很低。而转接至诱导培养基和继代培养基后,采用生长素苯乙酸(NAA)和细胞分裂素培养,可以改进愈伤组织的质量。如籼稻在含2 mg/L 24-D的NB培养基中能诱导出愈伤组织,但如再添加1 mg/L的6-糠基氨基嘌呤(KT)和1 mg/L的NAA后,从外形上看,愈伤组织将变得比较致密,较硬,颗粒状结构多,易于分化,提高了植株的再生频率。 生长素NAA和吲哚乙酸(IAA)对植物细胞的毒害作用较轻,产生的愈伤组织较易分化,使用范围为0.001~10 mg/L,但IAA诱导愈伤组织的效果比NAA稍差。在愈伤组织诱导阶段,添加外源生长素应优先考虑采用NAA、IAA,如两者都不能完成愈伤组织诱导时,再考虑采用2,4-D诱导。采用NAA、IAA诱导愈伤组织时,一般需要添加一定量的细胞分裂素,如绿豆、番茄、白菜花、金丝桃、月季等许多植物都能通过添加NAA、IAA和细胞分裂素产生愈伤组织。 愈伤组织诱导中常使用的细胞分裂素有6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、KT等。6-BA是最为常用的细胞分裂素,能促进细胞分裂,有利于愈伤组织的形态建成;KT对愈伤组织诱导率的影响不大,但在诱导培养基中添加KT可以改善愈伤组织的质量,在一定程度上能延缓愈伤组织的衰老,延缓其器官分化能力的丧失,从而提高植株再生频率;TDZ具有很高的生物活性,其同浓度的诱导愈伤组织效力高于6-BA、KT。虽然愈伤组织诱导大多需要同时添加生长素和细胞分裂素,但有时单独添加细胞分裂素也可实现愈伤组织的诱导,如外源TDZ能诱导黄芩外植体幼茎、子叶柄和下胚轴产生愈伤组织,并且随着培养基中TDZ浓度的增加,愈伤组织诱导率不断增加。通过添加6-BA和TDZ,可完成对槟榔的愈伤诱导。 1.2 植物愈伤组织的形态分化 在诱导愈伤组织分化阶段,一般需要配合添加生长素和细胞分裂素。由于2,4-D对细胞有毒害作用,因此,当使用2,4-D诱导脱分化后,一般应降低和去掉2,4-D,否则往往先生根,不能形成芽的形态分化。诱导愈伤组织分化最常用的生长素为NAA或IAA。如桑树一年生枝条上部冬芽在MS基本培养基上添加IAA和6-BA,形成愈伤组织并产生了芽的分化;中黑防杨的愈伤组织在添加生长素NAA和6-BA的条件下产生了芽的再分化;藤用2,4-D可诱导出愈伤组织,而采用NAA和6-BA才形成芽的形态分化。 诱导愈伤组织分化常用的细胞分裂素有KT和6-BA,但两者的作用各有特点。在小叶杨×黑杨杂种后代的花药愈伤组织分化比较试验中发现,使用6-BA分化芽多、芽密、成丛状,但苗细高、瘦弱、木质化差;而添加KT分化出的芽稀且少,往往长成独棵苗,粗壮木质化程度高。大多数情况下需要将6-BA或KT与生长素结合使用才能完成形态建成。刀豆真叶、真叶叶柄、根、茎段和上胚轴产生愈伤组织转移到改良MS培养基中(添加10mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L IAA)产生芽的分化。油菜、竹蔗、杏、狗筋麦瓶草等许多植物产生的愈伤组织都是在生长素配合6-BA或KT下完成形态建成的。 除了植物激素的性质外,在形态分化过程中,生长素和细胞分裂素的比值对愈伤组织分化的意义更为重要,比值高利于根形成,反之则利于茎芽发生。当6-BA与NAA比值为3~6时,毛白杨愈伤组织芽分化率随着细胞分裂素与生长素比例的增高而升高。西南桦的茎段、叶、芽产生的愈伤组织在分化培养时,随着6-BA/NAA比值的升高,其产生不定芽的数量也相应增加。 脱落酸(ABA)在植物组织培养中的作用已在多种植物中有研究报道,其中有关ABA能促进形态建成的例子较多。如ABA处理能提高松树植株再生率;在培养基中补充外源ABA能够提高小麦胚性愈伤组织的发生频率。有关赤霉酸(GA)对形态