五子衍宗丸对糖尿病性白内障小鼠晶体氧化损伤和多元醇通路的影响.docxVIP

五子衍宗丸对糖尿病性白内障小鼠晶体氧化损伤和多元醇通路的影响 糖尿病性障碍（cd）是糖尿病患者导致盲目性障碍的重要原因之一。需要在视觉科学中解决这些问题之一。现代医学研究认为:DC的发病机制主要包括晶状体蛋白的非酶糖基化学说、渗透损伤学说和氧化损伤学说。近年来研究认为:晶状体多元醇通路的异常活跃也是DC发病的重要机制。中医学认为:肝开窍于目, 而肝肾同源, 因此, 对于老年人因糖尿病引发的白内障宜多从肝肾亏虚论治。五子衍宗丸是治疗肾精亏虚引发的不孕、不育症的经典方, 笔者依据中医异病同治的精神, 临床用于治疗DC效果显著。本实验研究从氧化损伤和多元醇通路的角度探讨五子衍宗丸治疗DC的作用机制, 以期为五子衍宗丸的进一步运用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 料喂,测定 SPF级昆明种小鼠, 雌雄各半, 体质量 (20±1) g, 标准饲料喂养, 均由甘肃中医学院科研实验中心提供。SPF级动物质量合格证号为SCXKC (甘) 2004-0006-000020, SPF级实验设施合格证号为SYXKC (甘) 2004-0006-0001561。 1.2 药物、试剂和试剂盒 D-半乳糖 (C6H12O6) , 分子量180, 上海生化制剂厂产品, 批100 g/L D-半乳糖溶液的配制方法:准确称取D-半乳糖粉末25 g置于烧杯中, 用适量的蒸馏水溶解后转于250 mL容器中, 加蒸馏水至刻度, 静置后放入冰箱中贮藏备用。五子衍宗丸, 北京同仁堂股份有限公司产品, 批号2030142, 成人口服, 1次6 g, 1 d 2次 (动物用剂量按体表面积法折算) 。氯化钠注射液, 甘肃扶正制药有限公司产品, 批号200010081-1;维生素C片, 西安利君精华药业有限责任公司产品, 批超氧化物歧化酶 (SOD) 试剂盒 (批 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 试剂盒 (批 、丙二醛 (MDA) 试剂盒 (批 , 均由南京建成生物工程研究所提供。JY4001电子天平, 上海天平仪器厂产品;UV-9100紫外分光光度计, 北京瑞利分析仪器公司产品;KDC-2044低速冷冻离心机, 科大创新股份有限公司中佳分公司产品;裂隙灯、Dionex 4500 I HPIC/ HPIC色谱仪, 苏州医疗器械厂产品。 1.3 半乳糖溶液制备模组、五子衍宗丸治疗组 将50只小鼠, 随机分为空白对照组、模型对照组、维生素C组、五子衍宗丸预防组和五子衍宗丸治疗组 5组, 每组10只。造模方法:除空白对照组外, 其余4组以左手抓住小鼠, 使腹部向上, 碘伏消毒后下部, 右手将注射针头于左下腹部刺入, 使针头向前推进 0.5～1.0 cm, 再以45°角穿过腹肌固定针头, 缓缓注入100 g/L 半乳糖溶液25 mL/ (kg·d) 。空白对照组以同样方法腹腔注射相应剂量生理盐水。1次/d, 造模时间20 d。模型对照组、维生素C组、五子衍宗丸治疗组造模时不给药, 五子衍宗丸预防组造模同时以五子衍宗丸水煎剂灌胃预防, 剂量为1.875 g/ (kg·d) (相当于60 kg成人剂量的5倍) , 至造模结束。造模结束后, 维生素C组以维生素C水溶剂灌胃治疗, 剂量为0.31 g/ (kg·d) (相当于60 kg成人剂量的5倍) ;五子衍宗丸治疗组用五子衍宗丸水煎剂灌胃治疗, 剂量为1.875 g/ (kg·d) (相当于60 kg成人剂量的5倍) , 连续20 d。等效剂量按人与动物体型系数折算, 受试动物给药容积均为0.01 mL/g 体质量。 1.4 测试指标 1.4.1 关键因素、指征、五子衍宗丸治疗各组收集药物检查市场 除空白对照组外, 其余4组在造模结束后检查晶状体混浊度, 然后断头处死模型对照组、五子衍宗丸预防组小鼠, 低温条件下快速摘取晶状体并采血;空白对照组、维生素C组、五子衍宗丸治疗组在治疗后检查晶状体混浊度, 然后处死, 摘取晶状体并采血。 晶状体混浊度按照以下分级标准, 共分5级:Ⅰ级, 无混浊 (晶状体透明清亮) ;Ⅱ级, 较混浊 (仅赤道部有空泡) ;Ⅲ级, 明显混浊 (空泡扩展到中央) ;Ⅳ级, 核混浊 (晶状体只在中央呈现核性白内障) ;Ⅴ级, 整个晶状体完全性白内障。 1.4.2 糖化血清蛋白指数测定 各实验组小鼠于给药前及给药20 d分别测定血糖 (以微量血血糖监测仪检测) 和血清胰岛素 (以放免测定法测定) , 给药20 d以NBT 还原反应法测定糖化血清蛋白指数。 1.4.3 还原型谷胱甘肽指标测定 取小鼠晶状体组织以冰冷的生理盐水冲洗, 滤纸吸干, 称质量后用眼科小剪刀尽快剪碎, 置于匀浆器中加适量生理盐水, 在玻璃