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植物组织培养技术的研究进展 1 植物无性系组织培养技术的应用 通常，在生产中，幼苗通常通过繁殖、种子繁殖、修剪、移植或埋葬枝条和生根来繁殖，但这些方法不同。比如苧麻是多年生植物,目前生产上多用分蔸繁殖法或种子繁殖法。分蔸繁殖,繁殖系数低,速度慢,种子繁殖则容易发生变异。Musa balbisiana是商品香蕉的1个野生亲缘物种,其种子在自然条件下不能萌发。我国特有的毛白杨(populus tomentosaCarr),插枝生根比较困难,扦插繁殖成活率不稳定,常采用嫁接或埋条、埋根等方法进行无性繁殖,用材多,成活率亦低。菊花(Dendranthema morifolium),传统生产上是采用大芽扦插繁殖,但一些名贵品种不宜生根,致使生长弱,开花晚,无法大量繁殖生产以满足多方面的需要。菠萝[Ananas comosus(L.) Merr]的自然繁殖系数仅有2~3倍,用老茎切片繁殖法的繁殖系数也只能提高15倍,因此影响了良种的繁殖与推广。 1958年,Steward和Reinert在胡萝卜愈伤组织和细胞培养实验中获得了植株,科学地证实“植物细胞的全能性”,为植物组织培养技术奠定了理论基础。经过30多年的实验研究,目前已有600多种植物能用组织培养方法形成芽、胚状体及完整的植株。在离体培养下植物细胞所具有的这种能重新形成新个体的“全能性”,使组织培养技术在保持优良种质,加速植物的无性繁殖等应用中,取得了越来越多的成功,是快速繁殖优良植株的捷径。自20世纪60年代法国Morel开始用组织培养进行兰花的无性繁殖以来,用组织培养进行无性繁殖已在国内外得到了广泛的应用。我国广西钦州地区由雷林1号桉(Eucalyptus leizhouNo.1)优树获得的试管植物已开始用于造林;马铃薯(Solanum tuberosumL.)的无毒苗已大面积栽种;已用组织培养方法迅速繁殖北美红杉(Sequoia sempervirens(Lamb.)Endl.)。 植物无性系的无菌快速繁殖发展如此迅速缘于以下优点: (1)可以保持植物的优良特性和性状。由于大多数果树和观赏植物都是高度杂合的,因此它们的种子后代不可能与原种完全相同。只有无性系产生的植株,在遗传上才能与亲本植物完全相同,从而使品种的特性代代相传。一个品种通过无性繁殖可产生在遗传上等同的多个拷贝,其中由一个个体通过无性繁殖产生的一个群体称为一个无性系。在自然界中,无性繁殖的途径有二,一是无融合生殖,即不经过减数分裂和受精而形成种子:二是营养繁殖,即由母株的营养部分再生出新的植株。无融合生殖只发生在少数几个物种,因此园艺家一直采用营养繁殖的方法对入选品种进行无性繁殖,从而保持植物的优良性状。对于很少产生或不产生有生活力的种子,营养繁殖是唯一的繁殖方法。而组织培养技术,作为植物营养繁殖的一个新手段已被广泛应用。 (2)用组织培养法进行繁殖周期短,繁殖快,节省空间。当前微繁最主要的用途是替代传统的营养繁殖方法以增加繁殖系数。而在离体条件下繁殖系数的提高,必然会显著缩短一个新品种由选育到推广所需的时间。如通过组织培养,由一块很小的,甚至是极微的植物组织,在12个月之内可以产生100万以上植株,如此高的繁殖速度是任何传统的无性繁殖方法所不能达到的。枝条的增殖周期很短(14~42 d),而每个周期都能导致枝条数的几何级数增长。澳洲青苹(Malus pumila)离体培养时,由1个茎尖可以在8个月内繁殖60 000个以上苹果枝条。对于兰科植物来说,微繁是惟一有效的进行大规模无性繁殖的方法。此外,在组织培养中,植物的繁殖可以不受季节的影响,周年连续进行。 (3)可以通过组织培养的手段获得无病原菌的或无病毒的植株。消除病害的问题在经济树种、花卉生产上很受重视,因为大多数苗木连续采用扦插或嫁接等方法进行无性繁殖,体内病毒有所积累,严重地影响了果树的生长发育,甚至导致毁灭性的灾害而影响苗木生产的发展。一般都应用热处理法获得无病毒植物,但此法的主要限制在于并非所有供试植物都对热处理敏感,而且在热处理之后只有一小部分植株能够存活。茎尖培养方法具有更广泛的应用,在应用组织培养方法以获得无病毒植物时,所用的外植体是茎尖或顶端分生组织,这是因为病毒在植物体内的分布是不均匀的,在受浸染的植株中茎尖或顶端分生组织一般无毒或者只携带浓度很低的病毒。在无菌条件下仔细地剥出茎尖,然后在合适的培养基上进行培养,一般可由茎尖再生出无病毒的植株。通过这种方法已得到的无病毒植株有草莓(Fragaria ananassaDuch),马铃薯,香石竹(Dianthus cargophyllasL.)等。 2 植物快速繁殖的类型 利用组织培养进行无性繁殖大约可以经下列5种途径达到大量繁殖的目的。 2.1 知识产权法扦插产生无性系无根苗 这是用组织培养方法