一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基因载体及.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 111440824 A (43)申请公布日 2020.07.24 (21)申请号 202010452576.7 (22)申请日 2020.05.26 (71)申请人 北京化工大学 地址 100013 北京市朝阳区北三环东路15 号 (72)发明人 徐福建　祁宇　俞丙然　 (74)专利代理机构 重庆信航知识产权代理有限 公司 50218 代理人 孙章虎 (51)Int.Cl. C12N 15/87(2006.01) C08G 65/26(2006.01) 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (54)发明名称 一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建 肝靶向阳离子基因载体及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于乳糖通过氨基-环氧 开环反应构建肝靶向阳离子基因载体的制备方 法，步骤为：1)将氨基化乳糖与异氰尿酸三缩水 甘油酯在二甲基亚砜中，在惰性气体保护下进行 反应，反应温度40～60℃，反应24～48小时；2)步 骤1)反应结束后，加入乙二胺，升温至50～70℃， 反应1～3小时，反应结束后透析，得到白色絮状 聚合物。基于乳糖通过绿色且反应条件温和的氨 基-环氧开环反应制备低毒高效并且具有肝脏靶 向效果的阳离子基因载体，不但能够有效实现基 因转染，而且可以实现核酸的靶向递，并且能够 A 介导CRIPSR/Cas9基因编辑系统实现有效的基因 4 编辑。 2 8 0 4 4 1 1 1 N C CN 111440824 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基因载体的制备方法，其 特征在于，步骤为： 1)将氨基化乳糖与异氰尿酸三缩水甘油酯在二甲基亚砜中，在惰性气体保护下进行反 应，反应温度40～60℃，反应24～48小时； 2)步骤1)反应结束后，加入乙二胺，升温至50～70℃，反应1～3小时，反应结束后透析， 得到白色絮状聚合物。 2.根据权利要求1所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，所述透析的截留数均分子量为1000～7500。 3.根据权利要求2所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，所述透析的截留数均分子量为3000-5000。 4.根据权利要求1所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，所述的白色絮状聚合物的分子量分布指数为1.8～2.0。 5.根据权利要求1所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，按质量分数计，所述的氨基化乳糖0.4～0.6份，异氰尿酸 三缩水甘油酯0.1～0.4份，乙二胺0.1～0.3份。 6.根据权利要求5所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，按质量份数计，所述的氨基化乳糖0.5～0.6份，异氰尿酸 三缩水甘油酯0.2～0.3份，乙二胺0.2～0.3份。 7.根据权利要求6所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，按质量份数计，所述的氨基化乳糖0.57份，异氰尿酸三缩 水甘油酯0.22份，乙二胺0.21份。 8.根据权利要求1所述的一种基于乳糖通过氨基-环氧开环反应构建肝靶向阳离子基 因载体的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的反应温度为50～5