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柱前衍生法测定多胺含量的研究及其在海洋生物样品中的应用的中期报告
该研究旨在开发一种基于液相色谱-柱前衍生化技术的多胺含量测定方法,并应用于海洋生物样品中。目前已完成部分实验,以下为中期报告。
实验步骤:
1. 采集海洋生物样品并处理:
选择肉眼可见的生物样品,包括鱼、贝类和海藻等。将样品挑出后,在?20℃冷冻干燥24小时,然后使用高速离心分离出细胞外液。将细胞外液调整至pH11.0,使用5%三氯乙酸饱和溶液进行沉淀蛋白质,加入乙醇析出后进行干燥,最后用氮气吹干。
2. 制备柱前衍生化试剂:
制备三种不同的柱前衍生化试剂,分别为乙酸乙酯/三氯化铝(EE/AlCl3)、吡啶酰亚胺(PI)和4-氨基苯甲酸酐(DABS-Cl)。
3. 柱前衍生化及液相色谱-荧光检测:
将样品中的多胺与柱前衍生化试剂反应,生成荧光染料,然后用液相色谱-荧光检测分离、定量和鉴别多胺,并计算样品中的多胺含量。
目前已完成需要注意的是,对于鱼和贝类样品中的多胺含量,EE/AlCl3试剂的反应最为适合。而对于海藻样品中的多胺含量,PI试剂的反应最为适合。在测定中,以三种不同的柱前衍生化试剂作为对照组,数据的重复性良好。
总结:
该研究采用柱前衍生法测定海洋生物样品中的多胺含量,结果表明该方法的重复性较好。但仍需进一步改进和完善,以提高该方法的准确性和稳定性。同时,还需要进一步拓展和完善该方法的应用范围。
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