新型鸭肝炎病毒生物学特性及病毒样颗粒表达载体的构建的中期报告.docxVIP

新型鸭肝炎病毒生物学特性及病毒样颗粒表达载体的构建的中期报告 本中期报告主要介绍了新型鸭肝炎病毒的生物学特性以及病毒样颗粒表达载体的构建情况。 一、新型鸭肝炎病毒的生物学特性 1. 分离鉴定 目前已从鸭肝炎死亡鸭的肝脏组织中分离出一种新型的鸭肝炎病毒，命名为DKAV-1。 2. 病理学变化 病理学检测表明，DKAV-1感染鸭后，鸭肝组织会出现明显的坏死现象，肝脏大小明显缩小，病变严重的鸭会出现黄疸等症状。 3. 分子学特征 DKAV-1的全基因组长约7.8kb，编码C、E、NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5共9个蛋白质。 二、病毒样颗粒表达载体的构建 针对DKAV-1的基因组结构，本研究利用分子克隆技术构建了一个病毒样颗粒表达载体，该载体包含DKAV-1的E、NS1、NS3、NS5四个蛋白质的编码区域。 1. 基因克隆 将E、NS1、NS3、NS5四个蛋白质的编码序列克隆到表达载体中，构建质粒pFASTBAC-DKAV-1。 2. 重组表达 将pFASTBAC-DKAV-1质粒转染到杆状病毒表达系统的宿主细胞中，通过重组表达获得了DKAV-1的四个蛋白质。 3. 病毒样颗粒组装 利用四个蛋白质在细胞内自主组装形成DKAV-1病毒样颗粒。经过电镜观察，DKAV-1病毒样颗粒形状呈现球形或者椭圆形，直径约为30纳米。 4. 功能鉴定 通过Western blotting等方法对获得的DKAV-1病毒样颗粒进行了功能鉴定，结果显示病毒样颗粒能够与鸭肝炎病毒感染的动物血清进行特异性反应。 综上所述，本研究对新型鸭肝炎病毒DKAV-1的生物学特性进行了初步研究，同时构建了DKAV-1病毒样颗粒表达载体并表达成功，为后续研究奠定了良好的基础。