烟草上b型烟粉虱对烟蚜生理适应差异的响应.docxVIP

烟草上b型烟粉虱对烟蚜生理适应差异的响应 烟虱子是世界上的重要害虫，有20多种生物类型。其中，b型烟虱是中国的重要外来入侵害虫。自20世纪90年代该虫侵入我国后, 迅速传播蔓延, 已成为多种植物上的害虫优势种, 给农业生产带来严重的损失。目前, 在许多国家和地区已发现B型烟粉虱可竞争取代非B型烟粉虱和温室白粉虱的现象 (Tsueda and Tsuchida, 1998,Pascual and Callejas, 2004) 。 昆虫与植物存在协同进化关系, 植物在进化过程中可对植食性昆虫形成多种防御机制, 也是植物在遭受植食性昆虫危害后所表现出的防御特性 (Haukioja, 1990) 。当昆虫感知到植物的防御变化时, 一些相应的反防御策略也随之产生 (Walling, 2008) , 其中生理适应机制是其重要的方面。保护酶和消化酶这两类重要酶系, 在维持昆虫正常的生理生化代谢方面具有重要作用, 因此常被用来作为衡量昆虫生理适应能力的指标之一 (Lozinskayaet al., 2004) 。研究表明昆虫对寄主植物的适应差异与这两类酶的活性改变有关 (Ashidaet al., 1990;Zhu-Salzmanet al., 2003) 。徐艳聆等 (2006) 研究发现亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis取食转Bt基因抗虫玉米后, 类胰蛋白酶活性显著高于对照, 认为这一机制可能与亚洲玉米螟对Bt的适应性有关。陈建明等 (2002)研究发现白背飞虱取食水稻抗虫品种时, 虫体内SOD和CAT活性明显增加。 作者在前期研究中发现, B型烟粉虱在烟草上对烟蚜具有明显的种间竞争优势, 室内试验证明, B型烟粉虱为害的烟草对随后取食的烟蚜的存活率、生长发育和繁殖均有显著的不利影响 (未发表数据) 。同为韧皮部取食的昆虫B型烟粉虱和烟蚜, 取食B型烟粉虱为害的烟草后, 其生理适应性是否存在差异?二者的生理适应性是否与体内保护酶和消化酶活性的变化有关?探明这些问题对进一步揭示外来入侵害虫B型烟粉虱的入侵机制和对烟蚜的竞争优势均有重要意义。 1 材料和方法 1.1 实验品种sicae B型烟粉虱Bemisia tabaci和烟蚜Myzus persicae采自山东省泰安市郊甘蓝植株上, 转接于山东农业大学温室内K326烟草品种上连续饲养2代以上、繁殖建立实验种群。该种群经北京市农林科学院线粒体DNA COⅠ基因序列鉴定为B生物型。 1.2 塑料托盘育苗 烟草品种为K326, 由国家烟草北方育种中心提供。在玻璃温室中采用塑料托盘育苗, 待烟苗长至3～4叶期时, 移入花盆 (Φ=12 cm, h=10 cm) , 每盆1株, 网罩下培养, 生长至有5张展开叶时供试验用。 1.3 烟草植株生物量测定 选取上述生长一致的烟草植株 (有5张展开叶) , 每6株放在一个罩笼内 (50 cm×50 cm×50 cm) , 按每株200头左右接入烟粉虱成虫 (雌雄比约为1∶1) , 产卵24 h后将成虫移除, 保留虫卵, 待卵孵化并多数发育至2～3日龄的3龄若虫时供测定。此时烟草植株生长至有7～8个伸展叶片, 其中下部1～4叶为带虫叶片, 从第5叶向上均为无虫叶片, 第6～8张叶片均表现出叶绿素减少, 叶脉明显变白, 将之称为系统白脉叶片。选下部叶片上烟粉虱若虫达6～8头/cm2烟草30株为材料, 进行再接虫试验。以笼罩无虫植株作为对照。试验在恒温养虫室中进行, 温度为23±2℃, 相对湿度为75%±5%, 光周期为L∶D=12∶12。 1.4 烟粉病虫苗/烟/鱼成蚤建立酶系统 分别在经B型烟粉虱前侵染的烟草植株的系统白脉叶片 (从下往上数的第6叶位) 上和对照无虫植株的相应叶位上, 用小叶笼分别接入同一种群羽化后2～3 d的烟粉虱成虫 (雌雄比约1∶1) 、每个叶笼约50头, 以及1～2日龄的烟蚜无翅成蚜、每个叶笼20头。待其取食6, 12, 24, 48和72 h时, 选取试虫制备酶液。各处理和对照重复3次, 每重复3株烟草。试验在恒温养虫室中进行, 温度为23±2℃, 相对湿度为75%±5%, 光周期为L∶D=12∶12。 1.5 酶源的制备 分别取烟粉虱成虫100头或烟蚜无翅成蚜20头于匀浆器内, 加入1 mL 0.04 mol/L (pH=7.0) 磷酸缓冲液, 在冰浴下匀浆, 再将匀浆液置于4℃, 5 000 r/min下离心10 min, 取上清液作酶源。每一样品重复3次。 1.6 光催化机反应 参照李周直 (1994)的方法。在3.6 mL 反应液中, 含0.05 mol/L磷酸缓冲液 (pH= 7.0) 2.3 mL, 13.37 mmol/L 蛋氨酸0.2 mL, 77.12 μmol/L氮蓝四唑 (NBT) 0.5