益生菌剂胃酸耐受性评价方法标准文本.pdfVIP

益生菌剂胃液耐受性评价方法 1 范围 本文件规定了益生菌剂在模拟胃液中的耐受性评价方法，其他菌剂可参考本方法执行。 本文件适用于粉末状、颗粒状等益生菌剂的胃液耐受性评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文本必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682 分析实验室用 水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 益生菌 probiotics 当摄取足够数量时，能对人体起到有益健康作用的活的微生物。 3.2 益生菌剂 probioticsculturespreparations 一种或多种活性益生菌，经发酵、富集、乳化或不乳化、干燥或不干燥、添加或不添加辅料、混合 或不混合、包装等工序制成的制剂。 3.3 胃液耐受性 resistancetogastricjuice 益生菌剂在胃部环境中耐受胃液的程度，以益生菌经胃液处理后的活菌总数与初始活菌总数的比值 表示。 4 设备和材料 除微生物实验室常规设备外，其他设备和材料如下: 4.1 天平：感量0.01g。 4.2 pH计：精确度0.1，每次使用前需按照仪器说明书进行校准。 1 4.3 涡旋混合器。 4.4 恒温水浴锅： （50±1）℃。 4.5 拍击式均质器及无菌均质袋。 4.6 恒温震荡水浴锅： （37±2）℃。 4.7 恒温培养箱： （37±2）℃。 4.8 容量瓶：10mL、100mL。 4.9 无菌试管：18mm×180mm或15mm×150mm。 4.10微量移液器及无菌吸头：1mL、5mL。 4.11无菌注射器。 4.12针头过滤器：0.22 μM。 4.13离心管：50mL。 4.14无菌培养皿：直径90mm。 4.15厌氧装置。 5 培养基和试剂 本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T 6682中三级水的规格，所用试剂，在未注 明其他规格时，均指分析纯。分析中所用标准滴定溶液，杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注 明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。 5.1 氢氧化钠：CAS 号1310-73-2。 5.2 浓盐酸 （12mol/L）：CAS 号7647-01-0。 5.3 氯化钾：CAS 号7447-40-7。 5.4 磷酸二氢钾：CAS 号7778-77-0。 5.5 碳酸氢钠：CAS 号144-55-8。 5.6 氯化钠：CAS7647-14-5。 5.7 六水合氯化镁：CAS 号7791-18-6。 5.8 碳酸铵：CAS 号506-87-6。 5.9 二水合氯化钙：CAS 号10035-04-8。 5.10 胰蛋白胨：CAS 号73049-73-7。 5.11 L-半胱氨酸盐酸盐一水物：CAS 号7048-04-6。 5.12 矿物油：CAS 号8042-47-5。 6 试剂溶液 2 6.1 1 mol/L氢氧化钠溶液 称取4.0g氢氧化钠于烧杯中，加水并搅拌溶解，待溶液冷却到室温后用水定容至100mL。 6.2 1 mol/L盐酸溶液 移取8.3 mL浓盐酸溶于80 mL水中，再加水定容至100 mL。 6.3 电解质溶液A 称取氯化钾0.064 g、磷酸二氢钾0.015g、碳酸氢钠0.263g、氯化钠0.345g、六水合氯化镁0.003g、 碳酸铵0.006g、1.5g胰蛋白胨、0.05gL-半胱氨酸盐酸盐一水物，加入95mL 蒸馏水溶解后，用浓盐 酸 （5.2）或1mol/L 氢氧化钠溶液 （6.1）调节pH 至3.0，定容至100.0mL，121℃高压灭菌15min~20 min。 6.4 电解质溶液B 称取二水合氯化钙0.022g，加水溶解并定容至 100.0mL，121℃高压灭菌15min~20min。 6.5 稀释液 称取8.5g 氯化钠，加入 1000mL 蒸馏水