实验7ABO血型鉴定及交叉配血实验_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学).docVIP

实验七 ABO血型鉴定及交叉配血实验 一、实验目的 通过鉴定实验和配血实验来学习、掌握人类ABO血型的原理和方法。 二、实验原理 血型是特指血细胞膜表面抗原的类型。ABO血型系统是一类常用的血液分型体系。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型(表7-1)。 表7-1 ABO血型系统中的抗体和抗原 血 型 红细胞膜上所含的抗原 血清中所含的抗体 O 无A和B 抗A和抗B A A 抗B B B 抗A AB A和B 无抗A和抗B 此外人体还存在另一类Rh血型系统，可分为Rh(+)和Rh(-)。与ABO血型系统不同，人群中Rh血型的不匹配非常罕见，尤其在黄种人中，Rh(+)型占到99.7%,而Rh(-)型还不到0.3%。所以在医疗输血中，通常只考虑献血者和输血者之间ABO血型是否匹配。 ABO血型在人群中的分布，存在着地理环境及民族、种族的差异，在我国汉族人群中，各血型的比例由多到少依次是O(34.11%)﹥ B(28.98%)﹥A(28.29%)﹥AB(8.69%)。 交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。输血时，主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集，其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。前者叫交叉配血的主侧，后者称为交叉配血的次侧。只有主侧和次侧均无凝集，称为“配血相合”。如果主侧凝集，称为“配血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。 三、实验材料 人外周血 四、实验器材与试剂 (一)器材采血针、尖头滴管、载玻片、1.5ml Eppendorf管、75%酒精棉球、消毒干棉球和记号笔。 (二)仪器显微镜、离心机。 (三)试剂 标准A血清、标准B血清、生理盐水、碘酒。 五、实验操作 （一）ABO血型鉴定 1．用记号笔在载玻片两端分别作好标记A、B。 2．采血 先揉搓采血的地方(小指或耳垂)，使血流畅通，以75%酒精棉球消毒皮肤，待酒精挥发后用右手拇指及食指捏紧采血处，使皮肤紧张，用消过毒的采血针迅速刺破皮肤，松开手指，血液自然流出，用消毒干棉球擦去第一滴血。用两支尖头滴管分别吸取标准A血清和标准B血清，分别滴一滴于载玻片的A端和B端。注：采血针用前要严格消毒，严禁交叉使用！ 3．用吸管吸一滴血，以少量生理盐水稀释，分别滴于载玻片两头标准A血清和标准B血清中。 4．室温下静置10～15 min，观察凝集现象：先肉眼观察是否出现红色点状或小片状凝集块；再在低倍显微镜下观察红细胞是否凝聚成团。 5. 根据被试者红细胞是否被A、B型标准血清所凝集来判断其血型，作好记录。 （二）交叉配血实验 1. 血样采集及血清的制备：如上法分别获取受血者及供血者静脉血各0.5 ml，用尖头吸管移至Eppendorf管中，标明供血者与受血者，各取用一滴制备红细胞悬液，其余的待其凝固后析出血清备用。 2. 取二试管，分别注明“主”、“次”字样。前者滴入供血者红细胞悬液一滴和受血者血清一滴；后者滴入受血者红细胞悬液一滴和供血者血清一滴。混匀后在离心机上以1000转/分的速度离心1分钟，取出观察凝集，方法如实验（一）。 六、作业及思考题 根据所作的交叉配血血型，填写下表，并说明受试者可接受和输血给何种血型的人，试述理由?试述观察到的凝集反应的现象。 表7-2 不同血型配合时的凝集现象 （”+”:凝集；“-”：不凝集） 凝集反应 输血者 受血者 O型 A型 B型 AB型 主 次 主 次 主 次 主 次 O型 A型 B型 AB型