转基因败育毛白杨叶片气孔行为异常的研究.docxVIP

转基因败育毛白杨叶片气孔行为异常的研究 白杨树属于杨柳树科。白杨树是杨家的一种。它生长迅速，适应性强，树干直而直，树形优美，在城乡环境的绿化美化和工农业材料中发挥着重要作用。通过组织培养快速繁殖良种已是目前广泛应用的技术,但试管苗在高湿环境下增殖、生长,其气孔的形态和生理都与室外生长的正常苗或温室苗明显不同,这些差异是导致试管苗保水能力差、移栽易死亡的主要原因之一。目前有关试管苗气孔行为观察的报道较少。笔者通过比较转基因败育毛白杨雄株试管苗与10年生植株叶片下表皮气孔密度、气孔大小、气孔开度日变化、气孔开张率日变化的差异,探寻试管苗叶片气孔行为异常的原因,旨在为进一步揭示毛白杨试管苗气孔运动作用机制及解决毛白杨移栽成活率提供依据。 1 材料和方法 1.1 供试材料的选择 试验所用转基因败育毛白杨雄株试管苗由河北农业大学林学院组织培养实验室提供,培养间培养温度为(25±1)℃,光照强度为1 600 lx,光照时间为16 h/d,试管苗培养30 d左右,选取靠近瓶口端的第2、3层叶片作为供试材料。10年生转基因败育毛白杨雄株于2010年8月中旬采自河北农业大学标本园,选取长势良好的功能叶片作为试验用苗。 1.2 气孔大小及气孔开度测量 分别取试管苗和10年生植株叶片下表皮,用指甲油涂抹后撕膜制成切片,在OLYMPUS光学显微镜下用Scopephoto图像分析测量软件观测气孔密度、气孔大小、气孔开度日变化和气孔开张率日变化。测量时,在10×40倍下,随机选取5个视野,每视野随机选10个气孔,重复3次。气孔密度用单位叶面积的气孔数表示;气孔大小用气孔外纵径×气孔外横径表示;气孔开度以气孔开口的纵横径之积表示,即内横径×内纵径;气孔开张率=气孔开张数/观察气孔总数×100%。日变化观察取样时间为1:00、3:00、5:00、7:00、9:00、11:00、13:00、15:00、17:00、19:00、21:00、23:00。 2 结果与分析 2.1 气孔密度对测定植株的影响 由图1可知,试管苗气孔密度为255.10个/mm2,10年生植株气孔密度为374.15个/mm2,试管苗气孔密度小于10年生植株,经方差分析,二者差异达0.01极显著水平。 2.2 气孔大小及显著性实测 由图2可知,试管苗气孔为610.86 μm2,10年生植株气孔为112.97 μm2,试管苗气孔明显比10年生植株气孔大,经方差显著性测验,二者差异达0.01极显著水平。 2.3 气孔开度日变化 由图3可知,试管苗气孔开度大于10年生植株,试管苗气孔开度在60.53～92.17 μm2变化,10年生植株则在16.70～18.74 μm2变化。试管苗气孔开度日变化曲线与10年生植株不同:试管苗气孔开度7:00～9:00呈持续上升状态,并在9:00时达到日变化中的第1个高峰,此后持续下降,到11:00时气孔开度骤减,此后再次持续上升,并在15:00时达到日变化中的第2个高峰,此后再下降,到19:00时又略有上升,然后再下降,直到第2天早上7:00才开始上升;10年生植株5:00～19:00气孔开度日变化曲线较平直,变化幅度不大,但在9:00和15:00也出现2个小峰,而在晚上21:00到第2天凌晨3:00,气孔开度为0。试管苗气孔开度的变化明显,最小值与最大值之比约为0.66∶1,日变化曲线呈明显的波峰状;10年生植株变化很小,最小值与最大值之比约为0.89∶1,日变化曲线很平稳,无明显波动。 2.4 气孔开裂率 由图4可知,10年生植株叶片气孔开张率表现出昼夜周期性,5:00～9:00气孔开张率显著增加,由11%增至77%,并在9:00达到第1个高峰,此后开始下降,到11:00时气孔开张率下降到43%,此后再次持续上升,并在15:00达到第2个高峰,此后再下降,在15:00～19:00,气孔开张率由86%减少到7%,晚上21:00到第2天凌晨3:00,气孔开张率为0,即气孔全部关闭。而试管苗叶片在一昼夜中气孔开张率均为100%。 3 自身气孔开度表现 气孔是植物体与外界环境进行气体交换的门户,其开闭控制着植物的蒸腾作用、光合作用和呼吸作用等重要生理过程。植物水分散失主要通过气孔蒸腾,而气孔蒸腾的强度受叶片上的气孔密度和气孔开度的调控。转基因败育毛白杨雄株试管苗叶片下表皮气孔密度小于10年生植株,二者差异极显著,说明试管苗保水能力差、移栽成活率低不是由于气孔密度大造成的,而是与气孔开度有关。 许多研究表明,与自然条件下生长的植株相比,试管苗叶片的气孔保卫细胞较圆,向外凸起,气孔大小、气孔开度都明显增大,气孔不能关闭,尤其是气孔开度增幅显著,可达自然条件下生长苗木的几倍到几十倍。该试验也发现,转基因败育毛白杨雄株试管苗叶片气孔大小、气孔开度明显大于10年生植株,试管苗