产几丁质酶枯草芽孢杆菌g3菌剂对番茄的田间防效.docxVIP

产几丁质酶枯草芽孢杆菌g3菌剂对番茄的田间防效 根据上述报道，产聚酶沿线酶善草芽菌（b.surtilis）能够抑制多种植物致病性病原体，并具有成为生物活性剂的潜力。1990年以来,用枯草芽孢杆菌制备生防制剂防治多种植物病害成了研究热点。国内有大量研究报道;国外已有商品生产。例如,美国Agraquest公司用枯草芽孢杆菌QST713菌株开发出活菌杀菌剂SerenadeTM,并于2000年通过美国环保局(EPA)的登记,用于防治多种作物的白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等病害。本文报道G3菌剂防治菜豆炭疽病、茄子菌核病和番茄叶霉病的盆栽试验结果以及G3菌剂对黄瓜和茄子苗期的促生作用。 1 材料和方法 1.1 干草芽菌实验菌剂的制备 1.1.1 病毒 枯草芽孢杆菌(B.subtilis) G3为本课题组所分离并保存。 1.1.2 湿料灭菌方法 市售新鲜麦麸以等重量肉汤培养液(w/w)混匀,分装于500mL三角瓶中,每瓶湿料200g,121℃灭菌30min。用50mL无菌水将培养好的克氏瓶斜面菌种洗出制成芽孢悬浮液,每瓶接种5mL,拍瓶后于30℃培养3d (中途拍瓶二次),培养结束,挖瓶置室内风干,塑料袋内保存并测定每克活芽孢数。 1.2 真菌菌株的培养 1.2.1 病毒 油菜菌核病菌(Sclerotinia sclertiorum,简写Scl.s),由本课题组分离并保存。 1.2.2 菌种培养和培养 麦麸用等重量的PD培养液混匀,分装于500mL三角瓶中,每瓶湿料200g,灭菌后接入斜面菌种一块,25℃培养10d,菌丝长满培养基后冰箱4℃保存备用。 1.3 蔬菜和豆类碳疽病防治试验 1.3.1 疾病场地准备 蚕豆花季,在炭疽病明显的病株根部共取病土12kg(含水量约20%)。 1.3.2 加快芽孢杆菌gf的放养、育苗 取底部留孔的塑料箱(长、宽、高:40cm×30cm×20cm)2只,每箱加病土5kg(10cm厚),摊平,播种菜豆种籽40粒,同时均匀撒入20g G3菌剂(活芽孢数136亿/g,下同),最后覆土1kg (2cm厚),拍平。一层地膜封口后置温室20～25℃发芽。5d后种子大部分破土,揭膜,塑料箱移至室外10～20℃出苗,15d后植株8～10cm高时起苗检查发病情况,分0级(无病斑)、1级(有病斑,病斑长度小于1cm)和2级(病斑长度大于1cm)三个等级。以不加G3菌剂的箱作对照。 1.4 在碱性土壤中，g3菌剂对茄子幼苗的影响 1.4.1 scl.s固体菌种的制备 3月底在塑料大棚发菌核病的菜豆根部取病土5kg,加堆肥1kg和1瓶刚培养好的Scl.s固体菌种(长有大量的菌核)混合均匀,装入密闭塑料箱中,置温室25℃自然发酵10d。 1.4.2 自然发酵方法 100g G3菌剂加100mL水湿润后混入5kg肥沃菜园土中(含水量20%左右),用手充分拌匀置密闭塑料箱中于温室25℃自然发酵10d。 1.4.3 覆土、泥质、种子覆盖物的覆盖 塑料箱(同“1.3.2”) 内加菜园土5kg,摊平(10cm厚底土)。1kg G3带菌土(含20g G3菌剂) 与1kg菌核病土混匀,覆盖于底土上。100粒茄种子撒播于土面上,用手稍加翻动土层,使种子处于土层1～2cm处,拍平,塑料箱覆盖一层地膜保湿,于室温15～20℃培养出苗。空白对照箱用1kg菜园土替代G3带菌土,其余同G3菌处理箱。 1.4.4 死苗数试验 播种后逐日观察和记录箱内的变化(Scl.s菌丝萌发、繁殖和消亡,茄种子的萌发、出苗以及死亡),统计死苗数,第32天时起苗,测量株高和株干重。株高和株干重数据经方差分析、t测验,确定差异显著性。 1.5 在碱性土壤中，g3菌剂对黄瓜幼苗的促进作用 1.5.1 细菌根的制备 同“1.4.1”。 1.5.2 s3菌土制备 同“1.4.2”。 1.5.3 营养钵黄瓜培养 菌核病土和G3菌土分别以4∶0、3∶1、2∶2、1∶3和0∶4比例混合(5个处理), 每处理重复4次,每重复为1营养钵,装入上述混合土200g。自然土200g为对照。营养钵置瓷盘中,盘中加水以毛细管效应使钵中土壤吸饱水分,自然晾干1d,每钵插播刚破口的黄瓜种子5粒,温室内20～25℃培养。第13天时起苗检查出苗率、株高和株干重。 1.6 番茄霉病的防治 1.6.1 1%细菌溶液的制备 5g固体菌剂加500mL水浸泡10min,双层纱布过滤,滤渣在滤液中挤捏数次后弃去, 滤液滴加两滴沾着剂OP,搅匀。 1.6.2 叶霉病的发生 室内钵栽的番茄苗6棵,苗高15～20cm,自然发生严重的叶霉病。用小喷雾器全株喷药3棵,另3棵喷清水作对照,喷药后置室外遮光处培养,第3天和第7天先后二次检查喷药效果。 1.6.3 方法和疗效计算 每株4张复叶的全部小叶数为调查对象,按文献进行病叶分级和