巴戟天多糖对实验性抑郁症大鼠氧化应激损伤及认知行为的影响.docxVIP

巴戟天多糖对实验性抑郁症大鼠氧化应激损伤及认知行为的影响 抑郁是一种常见的心理障碍表现形式，是神经系统和心理因素的结果。其中，边缘系统和网络系统的损伤在抑郁的发病中起着重要作用。在不良的刺激下，体内氧化反应的激活是神经系统功能损伤的机制之一。巴戟天是一种具有抗逆性作用的中药。在本研究中，巴戟天糖对大鼠体内氧化反应和认知障碍的影响进行了探讨。 1 材料和方法 1.1 检测试剂和仪器 巴戟天根茎(广东肇庆产,经中药专家鉴定为南巴戟天),MDA及SOD检测试剂盒(南京建成生物工程研究所),烘干箱(上海精密仪器厂),721型分光光度计(北京仪器厂),荧光显微镜(北京仪器厂),切片机(北京仪器厂),T迷宫(美国自然基因科技有限公司供应)其它试剂为分析纯。 1.2 巴镖天多糖的提取 选取适量巴戟天根茎,烘干箱60℃烘干至恒重,精密称取100g,研磨成粉末状,于烧瓶中加蒸馏水浸泡(W∶W=1:25),酒精灯加热至75℃煎煮4h,注意观察溶液性状变化,形成巴戟天浸膏后冷却,后加入95%乙醇(W∶W=1∶4)提取巴戟天多糖,静置于冰箱中12h,保存温度2℃沉淀巴戟天多聚糖成分,离心得巴戟天多聚糖,经膜过滤、去蛋白、冰冻干燥,得巴戟天多糖。 1.3 动物饲养及不规律给予量 24只清洁级雄性SD大鼠由浙江大学医学院动物实验中心提供,7~8周龄,均重(200±25)g。随机分为对照组、模型组及干预组,每组8只,模型组及干预组大鼠分只孤养,采用日光灯不规律时间间隔光照,不规律时间给予饮水及饮食,不规律给予高温环境及冰水游泳,异味刺激及电击足底,共计饲养24d,造模结束。造模开始时干预组即给予巴戟天多糖干预,每日腹腔注射巴戟天多糖溶液1m L/kg(100mg/m L),模型组及对照组每日腹腔注射生理盐水1m L/kg。 1.4 t迷宫实验 大鼠造模24d后进行T迷宫实验考察大鼠认知行为能力,每个大鼠重复走迷宫5次,以减少偏向误差,计算每只大鼠的错误平均次数。 1.5 样品的采集和检测 1.5.1 血清中大鼠血清中的聚合酶活性检测 大鼠T迷宫实验结束后低温下处死,剪开心脏采集血液标本4m L,低温离心机2000G/min分离得血清,分两份保存于深低温冰箱,低温下摘取脑组织,采用4%低聚甲醛固定,以松果体为界,向头侧2mm厚度切取3段,石蜡包埋待检。 1.5.2 方法及操作注意事项 血清MDA及SOD水平检测采用比色法,血清标本梯度稀释,标本按要求加样、温育、清洗、显色,721型分光光度计(北京仪器厂)450nm处检测样品吸光度,按标准曲线计算样品MDA及SOD浓度,所有操作严格按照试剂说明书及仪器说明书进行。 1.5.3 荧光显微镜观察 取大鼠脑组织标本蜡块,4μm厚度连续切片,切片常规脱蜡水化,采用非免疫山羊血清室温孵育30min,阻断非特异性抗原,稀释NSE单克隆一抗,以0.05mol/L PBS冲洗3次,冲洗完毕后加入生物素标记的二抗孵育lh,孵育温度37℃,反应结束后PBS缓冲液冲洗10min,共3次,以缓冲甘油封盖,荧光显微镜观察,取5个不重叠视野计算平均值。 1.6 统计学方法 数据采用SPSS17.0汉语版统计学软件包处理,统计学方法采用方差分析,组间比较采用SLN-q检验,检验水准α=0.05,P0.05认为具有统计学意义。 2 结果 2.1 干预组与模型组血清检测结果比较 T迷宫实验结果显示,干预组T迷宫错误次数低于模型组(q=11.4,P=0.006),高于对照组(q=19.7,P=0.002),差异具有统计学意义。血清检测结果表明,干预组血清MDA浓度低于模型组(q=7.6,P=0.009),高于对照组(q=13.5,P=0.005),差异具有统计学意义。干预组血清SOD水平高于模型组及对照组(q=14.9,P=0.004;q=27.5,P=0.001),差异具有统计学意义。海马组织镜检结果显示,干预组海马区神经元水平高于模型组(q=8.9,P=0.008),低于对照组(q=10.6,P=0.008),差异具有统计学意义。 3 抑郁症与氧自由基 抑郁症是在多种因素作用下的情感功能障碍,抑郁症的发生与脑部情感相关中枢的结构及功能的损伤或变化密切相关,皮质及皮质下核团和结构中,与情感密切相关的部位损伤均可能出现抑郁症状及性格行为的改变,如额叶、网状上行结构及海马结构等,其中海马结构与情感障碍的关系密切,海马结构是哺乳动物的情感皮质下中枢,动物与情感有关行为如兴奋、恐惧、焦虑等均与海马区的神经元功能及神经递质的水平变化密切相关,在海马结构摧毁后,动物甚至出现明显的强迫性行为以及情感、性格的明显变化。近年来的研究显示,抑郁症是慢性的心理及生理应激过程,能够引起体内神经内分泌系统的功能变化,甚至伴有氧化应激系统的激活,引起中枢神经系统的氧化