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苏云金杆菌cry7Ab8基因的克隆表达及工程菌构建的中期报告
尊敬的评审专家：
我将向您介绍苏云金杆菌cry7Ab8基因的克隆表达及工程菌构建的中期报告，以下是具体内容：
一、研究背景及目的
苏云金杆菌是一种广泛存在于自然界中的土壤细菌，其中的cry7Ab8基因被广泛应用于昆虫害虫的生物控制。本研究旨在克隆并表达cry7Ab8基因，并构建该基因的工程菌，为进一步研究其毒力机制与发展新型昆虫害虫控制方式提供基础数据。
二、实验流程
1. cry7Ab8基因的克隆：采用PCR技术从苏云金杆菌MTCC 9345的基因组中扩增cry7Ab8基因，并将其克隆至表达载体pET28a(+)中。
2. 裂解液的制备与分离：将重组质粒pET28a-cry7Ab8转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，在IPTG诱导下表达cry7Ab8蛋白，利用超声波破碎法制备细胞裂解液，并利用Ni2+亲和层析柱纯化cry7Ab8蛋白。
3. cry7Ab8蛋白的鉴定与活性测定：通过Western blotting和SDS对cry7Ab8蛋白进行鉴定，并利用室内自制的法鲁克斯豆蚜生物测定法对cry7Ab8蛋白的毒力进行测试。
4. 工程菌的构建：将cry7Ab8基因插入现有的植物表达载体中，利用烟草叶片进行转基因实验，构建cry7Ab8基因的工程菌。
三、目前进展
目前，我们已成功地从苏云金杆菌MTCC 9345的基因组中扩增了cry7Ab8基因，并将其克隆到表达载体pET28a(+)中。我们已对cry7Ab8蛋白进行了表达和纯化，并利用Western blotting和SDS对其进行了鉴定，结果表明cry7Ab8蛋白已成功表达和纯化。同时，我们还对cry7Ab8蛋白的毒力进行了初步测试，结果表明该蛋白对法鲁克斯豆蚜有一定的毒力。此外，我们还开始进行cry7Ab8基因的植物表达载体构建和转基因操作。
四、下一步工作
下一步，我们将深入开展cry7Ab8蛋白毒性机制的研究，通过进一步的实验优化cry7Ab8基因的表达和纯化方式，同时，还将进行工程菌的构建和表达，以实现对cry7Ab8基因的更加深入的研究和应用。
以上即对苏云金杆菌cry7Ab8基因的克隆表达及工程菌构建的中期报告，希望能对您的评审工作有所帮助。若有任何疑问，欢迎随时联系我们。
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