基于gc-ms法的麻黄煎液中麻黄碱与伪麻黄碱的含量测定.docxVIP

基于gc-ms法的麻黄煎液中麻黄碱与伪麻黄碱的含量测定 麻黄汤是一种传统的中医方剂，由麻黄、桂枝、杏仁和甘草组成。为了探讨麻黄汤的组方原理,本实验采用了GC-MS联用,选用特征离子定量的方法,考察了各药味配伍组方药效变化的部分物质基础,为麻黄汤组方原理的研究提供依据。 1 药品、药材与药品 HP-6890型气相色谱与HP-5973型质量选择器联用;HP-Chemistation System工作站。 99.999 9%氦气(美国出品);密理博超纯水;乙醚、无水乙醇(分析纯,汕头市光华化学厂出品)。 麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinicaStapf的干燥草质茎,桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassiaPresl的干燥嫩枝,杏仁为蔷薇科植物山杏Prunus armeniacaL. var.ansuMaxim.的干燥成熟种子,甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensisFisch的干燥根及根茎。饮片购自广东省药材公司中药饮片厂,经本校中药鉴定学教研室鉴定。麻黄碱对照品(批号:0714-9903,供含量测定用),中国药品生物制品检定所提供;伪麻黄碱对照品(批号:1237-200002),国家麻醉品实验室提供。 2 方法和结果 2.1 不分流模式进样 HP-50+石英毛细管柱(30 m×0.25 mm),镀膜厚度0.5 μm,载气He,不分流模式进样,恒流,柱流量1.5 mL/min,线速度45 cm/s,进样口温度250 ℃,自动进样,进样量1 μL。柱温起始温度80 ℃,保持3 min,以5 ℃/min升至150 ℃,保持5 min,然后以10 ℃/min升至250 ℃,保持10 min。 2.2 ev的特性分析 离子源温度230 ℃,电离方式EI,电子能量70 eV,电离电压1 388 V,收集模式Scan,质量扫描范围30~450 amu,定量积分选用麻黄碱与伪麻黄碱特征离子58与72碎片离子积分。 2.3 对照品和样品溶液的制备 2.3.1 伪麻黄碱对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱35.87 mg,加1 mol/L NaOH溶液3 mL溶解,精确加入醋酸乙酯25 mL,密塞,充分振摇均匀,静置,加无水Na2SO410 g脱水,分别精确吸取醋酸乙酯溶液1,2,3,4,5 mL置5 mL量瓶中,加醋酸乙酯稀释至刻度,摇匀,作为麻黄碱对照品溶液。以盐酸麻黄碱计,其浓度依次为:0.283 3,0.566 7,0.850 0,1.133 3,1.416 7 mg/mL。精密称取伪麻黄碱11.16 mg,置25 mL量瓶中,加醋酸乙酯稀释至刻度,摇匀,再分别精确量取200,400 μL和1,2,4,10 mL,置10 mL量瓶中,加醋酸乙酯稀释至刻度,摇匀,作为伪麻黄碱对照品溶液。其浓度依次为0.008 9,0.017 8,0.044 6,0.089 3,0.178 6,0.446 4 mg/mL。 2.3.2 黄汤样本的组成 按麻黄汤的临床用量,各单味药的1次取样量为:麻黄10 g,桂枝6 g,杏仁10 g,甘草3 g。按单味药、两两配伍、三三配伍、麻黄汤及缺麻黄的麻黄汤的组方原则,组成9个样本。分别置500 mL圆底烧瓶中,准确加水120 mL,浸泡30 min,在相同条件下回流提取40 min,脱脂棉滤过,药渣及滤器加开水洗2次,每次35 mL,洗液与滤液合并,放冷,加水调整至200 mL,分别加10% NaOH溶液碱化至pH值为13,加乙醚萃取5次(50 mL,40 mL×4),乙醚液50 ℃水浴挥干,残留物加醋酸乙酯溶解,并定量地转移至25 mL量瓶中,摇匀,得麻黄汤各组方的供试品液。 2.4 线性方程 取上述麻黄碱与伪麻黄碱对照品溶液,分别按上述色谱与质谱条件进样,测定总离子流色谱图,选用麻黄碱与伪麻黄碱的特征离子58与72扫描,对麻黄碱与伪麻黄碱的总离子流色谱峰进行积分。以浓度为横坐标,以面积积分值为纵坐标作图,得麻黄碱(以盐酸麻黄碱计)的线性方程为Y=1.59×108X+1.76×107(线性范围0.28~1.42 mg/mL,r=0.999),伪麻黄碱的线性方程为Y=1.99×108X-2.85×106(线性范围0.008 9~0.446 4 mg/mL,r=0.999)。按上述色谱条件,麻黄碱、伪麻黄碱及麻黄阴性对照的总离子流色谱图见图1。 2.5 平均峰面积特征离子积分值的测定 取浓度为0.566 7 mg/mL的麻黄碱对照品液与浓度为0.017 8 mg/mL的伪麻黄碱对照品液,分别按上述条件进样,连续进样5次,测得麻黄碱、伪麻黄碱的平均峰面积特征离子积分值的RSD分别为2.13%、1.94%。对上述对照品溶液每隔5 h测定1次,结果25 h内两者所测数值的RSD分别为