抗生素微生物检定法.pptVIP

结果计算及判断 抑菌圈的测量以及结果的可靠性检验及效价测定 抗生素微生物检定法 * 抗生素微生物检定法 *** ***药品检验所 抗生素检测技术专题研讨班概况 《中国药典》2010版抗生素检测技术与方法概述 《中国药典》2010版抗生素有关物质检测 残留溶剂测定法 抗生素聚合物检查 《中国药典》2010版抗生素溶出度方法介绍 抗生素微生物检定法 《中国药典》2010版抗生素质量标准建立概述 抗生素药品质量标准提高的价值与技术策略 抗生素药品的特点 纯度一般较化学药品低 发酵类产品通常为多组分且活性组分易发生变异 稳定性一般较化学药品差 结构较一般化学药品复杂 抗生素检测技术与方法 高效液相色谱法 高效毛细管电泳法 气相色谱法 高分子杂质测定法 抗生素微生物检定法 溶出度 不溶性微粒 澄清度 溶液颜色 抗生素微生物检定法 定义：抗生素微生物检定法是利用抗生素在低微浓度下有选择地抑制或杀死微生物的特点，以微生物的抗菌活性为指标，来衡量抗生素中的有效成分效力的方法。 方法：本法是在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的一直作用，计算抗生素活性（效价）的方法。 量反应平行原理 琼脂球面扩散动力学公式： 奠定了管碟法量反应直线公式的基础 抗生素微生物检定法的概况 微生物检定法的特点 1.微生物检定法可直观、特异性地反映出抗生素药品的抗菌活性，显示临床的特点； 2.多组分抗生素由于不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、寒冷和活性的关系； 3.许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的分析方法测定其效价； 4.同时微生物法所需仪器设备简单，成本较低。 微生物检定法的局限性 本法测定的是有抑菌作用物质的总效价，测定结果不能反映药品的纯度，不能排除其他组分或活性杂质的干扰。 对复方制剂产品的检验，微生物检定法选择性差，效价测定受其他成分的影响。 如：妥布霉素滴眼液，配方中含苯扎溴胺作为防腐剂，苯扎溴胺具有抑菌作用，使样品的抑菌圈增大，导致标准品和样品的剂量反应曲线偏离，无法测准妥布霉素的含量。 抗生素微生物检定法分类 1.稀释法 2.浊度法 3.琼脂扩散法（管碟法和打孔法） 2010版药典采用管碟法和浊度法来测定抗生素的效价 抗生素微生物检定方法比较 稀释法 浊度法 琼脂扩散法 相同点 标准品、供试品抗菌效力的比较 不同点 等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况 不同浓度的抗生素溶液在含有试验菌固体培养基中的扩散情况 含不同浓度抗生素的液体培养基中有无细菌生长 用光度法测定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度 测定不同浓度的抗生素溶液在固体培养基表面产生的抑菌圈的大小 目的 抗生素最低抑菌浓度（MIC）的测定 抗生素抑菌效力的测定 应用 用于新药研制及临床药敏试验等方面 抗生素效力的测定方法 抗生素微生物检定法包括管碟法和浊度法 管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。 抗生素微生物检定法包括管碟法和浊度法 比浊法：通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况，利用分光光度法测定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度，从而衡量抗生素抑菌效力的发疯，可用于抗生素药物的含量（效价）测定。 浊度法与管碟法方法比较 比浊法 管碟法 相同点 标准品、供试品抗菌效力的比较 不 同 点 等量试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况 不同浓度的抗生素在含有试验菌固体培养基中的扩散情况 用光度法测定不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度 测定不同浓度的抗生素溶液在固体培养基表面产生的抑菌圈的大小 速度快，试验过程3-4小时，可在当天获得结果 速度慢，试验过程16-20小时，第二天才能获取结果 易于操作，比浊仪在线培养和测定，具有客观、精密便于自动化操作的优点 操作繁琐，多为手工操作，不易掌握 采用液体培养基，无扩散因素的影响，试验的灵敏度高，结果的精密度和正确度都较扩散法好 管碟法应用范围广，培养条件要求较宽，但实验过程长，试验结果易受琼脂扩散性的影响 浊度法 优点： 速度快，试验过程3-4小时，可在当天获得结果 易于操作，比浊仪在线培养和测定，具有客观、精密便于自动化操作的优点 采用液体培养基，无扩散因素的影响，试验的灵敏度高，结果的精密度和正确度都较扩散法好 浊度法 缺点： 对试验仪器的性能及试验器具的要求较高，如培养温度要求一致，比色管的清洁等 任何影响液体培养基内微生物生长的因素都会影响抗生素效价的测定 管碟