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liddle综合征患者的临床特征及基因诊断 liddle综合征的发病机制 李家综合征是一种常见的高血压病，具有先发高血压、低钾、低肾素和低醇血症。它对酶诱导剂（enac）钠通道（na）的抑制非常敏感，但对环磷酰胺吡啶没有敏感。近年来，由于活佛和分子遗传的发展，对lidle综合征的发病机制进行了深入研究。该综合征的遗传基础为编码ENaC的基因的β或γ亚单位发生突变引起上皮钠通道过度激活导致肾脏远曲小管对钠水重吸收增强所致。 由于临床医生对继发性高血压诊治重视不够,使得Liddle综合征一直被视为一种罕见病,患者长时间被误诊,造成血压控制困难,大量应用降压药物导致药物副作用增加,早年发生心肾功能不全等靶器官损害,脑卒中甚至猝死。Liddle综合征分子遗传机制的研究使基因诊断成为快速准确诊断的有效方法,本文对两例临床疑似Liddle综合征的患者进行外周血SCNN1B和SCNN1G基因检测,明确诊断、指导治疗,打破基础医学与临床医学之间的屏障,把基础研究获得的知识成果转化为临床应用。 1 对象和方法 1.1 研究对象和方法 1.1.1 中心住院的临床特征 2例于2010年6月至2010年10月在阜外心血管病医院高血压诊治中心住院的临床初诊Liddle综合征先证者和此两个家系的38位家系成员,先证者临床特征为发病年龄小,高血压家族史,口服多种降压药血压难以控制,低血钾,低肾素,低醛固酮,肾上腺CT检查未发现明显异常等。 1.1.2 首先，采集和处理样本并进行评估 1.2 链反应试验 1.2.1 外周血DNA的提取(盐析法); 1.2.2 采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增目的片段; 1.2.3 基因测序:将相应外显子的扩增产物送至北京华大基因科技公司测序,以PCR正向引物为测序引物进行测序; 2 结果 2.1. 家庭与繁殖 2.2 家庭与系统2 2.3 治疗配合性血钾 两个家系中共8例Liddle综合征患者明确诊断,给予适当限钠及口服阿米洛利5mg qd,监测血压和血钾水平,疗效显著,1个月后8位患者血钾及血压水平见表1。 3 py基序基因突变 本研究对2例青年难治性高血压患者进行了临床生化和ENaCβ亚单位和γ亚单位的基因突变检测,在编码ENaCβ亚单位的SCNNB1基因的13号外显子发现了两个错义突变(P614L和P616S),其中P614L为世界首次报道的新突变,明确了Liddle综合征的诊断,两例患者均有早发高血压家族史,收集两个家系的成员,6例家系成员(不包括先证者)被确诊为该综合征,确诊患者均接受限盐和口服阿米洛利治疗,疗效显著。 Liddle综合征的临床特征最初由Grant Liddle等人在1963年详细描述,其分子基础是ENaC基因(SCNN1B和SC-NN1G)功能获得性突变,最常见的突变是β或γ亚单位C羧基末端和富含脯氨酸的高度保守序列PY基序(P:脯氨酸、Y:酪氨酸、L:亮氨酸)断裂、错义、缺失、提前产生终止密码或移码突变所致。本研究的两个Liddle综合征家系的错义基因突变均位于ENaCβ亚单位的PY基序。 Liddle综合征关键性的病理生理改变是远端肾小管的ENaC对钠的重吸收增加,细胞外液容量扩张。PY基序基因突变导致Nedd4-2的WW结构域不能与ENaCβ,γ亚单位的PY基序结合,使大量活性ENaC内吞和降解不能发生,导致ENaC在远端肾小管密度增加,且持续性活化,钠重吸收增加,血压升高,醛固酮和肾素分泌受抑,钾重吸收减少,出现Liddle综合征的一系列临床症状。有关ENaC通道功能的定量研究显示,导致Liddle综合征的基因突变从增加ENaC通道的表达数量及该通道开放的几率两方面影响ENaC功能,研究者将携带引起Liddle综合征的PY基序的缺失或错义突变的ENaC在爪蟾卵细胞上表达,发现ENaC电流较野生型ENaC电流明显增加,验证了以上突变是导致Liddle综合征的原因。另有研究证实,患者淋巴细胞膜钠通道活性较正常对照者淋巴细胞膜钠通道活性明显增加。另外,Knight等发现,基因突变不仅增加细胞膜ENaC的表达,而且可以通过增加通道开放的程度使ENaC得活性处于最高状态;在鼠肾脏的集合管细胞中,EGF通过ERK1/2信号通路抑制阿米洛利敏感的钠通道电流并且降低ENaC mRNA的表达,最近有研究显示,PY基序的基因突变可阻断表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)通过细胞外信号调节激酶(extracellular signal–regulated kinases,ERK)信号通路抑制ENaC的表达,使远端肾小管ENaC的数量和活性大增,集合管主细胞对钠的重吸收,导致Liddle综合征;以上研究揭示了Liddle综合征分