虾蟹类卵黄蛋白原的基因克隆及分子特征分析.docxVIP

虾蟹类卵黄蛋白原的基因克隆及分子特征分析 蛋黄蛋白原（vg）是大型脂质转移蛋白质（ldt）的超家庭成员。它是一种大分子磷脂糖蛋白,其分子量大小在200~700 ku之间,含有共价键连接的糖和磷酸根以及非共价键相连的脂类,是非哺乳类卵生动物中卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体。Vn和Vg是组成雌性卵黄的主要成分,在卵黄发生期迅速积累并储存在卵中,是胚胎和幼体早期发育主要的营养来源。Vg作为“雌性特异性”蛋白,在雄性体内含量极低或没有,但某些雄性和幼体在外源性雌激素或类雌激素的诱导下,卵巢外器官也能合成微量的Vg。但由于雄性缺乏卵巢,使得新合成的Vg无法被有效吸收并利用而积存于血液中。Vg广泛存在于脊索动物、棘皮动物、两栖类、爬行类、鱼类、鸟类和昆虫等卵生动物中。从无脊椎动物到脊椎动物,它们在结构和功能上具有一定的类似性,但是也有许多不同点。十足目(Decapoda)是节肢动物软甲纲的一目,常见的有各种虾类、蟹类、寄居蟹类等,多数可供食用,是经济意义最大的一类甲壳动物。有关十足目动物Vg的研究最早可追溯到20世纪60年代,由Horn等在雌性蓝蟹Callinectes sapidus体内首次观察到Vn和Vg蛋白。到目前为止,国内外已经先后报道了10余种甲壳动物的Vg分子结构,部分已获得纯化的重组蛋白。本文主要就十足目虾蟹类Vg蛋白的合成转运途径、分子结构特征、同源进化、表达调控、生理功能等方面作一综述。 1 粗蟹类组织中vg的合成 Vg的合成和转运与卵黄发生(vitellogenesis)密切相关。甲壳动物的卵黄发生是一个各类营养物质(蛋白质、脂类、碳水化合物等)的形成以及在卵母细胞中积累的过程,是卵母细胞发育成熟的必要条件。 在卵黄发生的初期阶段,卵黄形成的原料主要来源于卵母细胞本身,即所谓内源性卵黄合成(autosynthesis)。正在发育的卵母细胞内开始合成Vg,但是在细胞内的合成途径因动物种类而稍有差异。虾类的卵巢为管状结构,卵母细胞位于基底膜的生发带内,并有中胚层包围,卵黄颗粒的积累一般发生在粗面内质网。在锯缘青蟹Scylla serrata,卵巢内大量活跃增殖的卵原细胞形成多核共质体,在粗面内质网组成的囊泡中可见Vg的生成。 随着卵黄发生的不断进行,外源性卵黄合成(heterosynthesis)开始介入。卵巢外器官在雌性激素(estrogen)的刺激下合成Vg,随即被分泌到血液中利用循环系统运输到卵巢,被卵母细胞通过受体(vitellogenin receptor,Vg R)介导的胞饮作用摄取,在细胞内被酶解修饰成几种较小分子量的卵黄相关蛋白,从而发挥其营养源作用。因此,在卵黄发生的后期,在甲壳动物的血淋巴中可以检测到高浓度的Vg。 现已被研究的甲壳动物Vg合成部位主要集中在肝胰腺、卵巢、血细胞及皮下脂肪组织。脂肪体是公认的昆虫Vg合成的位点,而肝胰腺被认为是甲壳类动物卵巢外最主要的Vg合成部位。虾蟹类中有关卵母细胞自身合成Vg的报道相对比较少,一般可归纳为两种主要方式:Vg在肝胰腺和卵巢中表达;Vg仅在肝胰腺中表达。 在不同种类的甲壳动物中,Vg的合成部位有所区别;在同一物种中也发现Vg在不同部位表达的情况。蓝蟹的血细胞参与了Vg的合成;在罗氏沼虾Macrobrachium rosenbergii,Vg仅特异性地在肝胰腺中表达;而在首次成熟的红螯螯虾Cherax quadricarinatus的卵黄发育后期,卵巢和肝胰腺中都能检测到Vg的表达,并且两者在氨基酸序列上存在一定的差异。高背长额虾Pandalus hypsinotus的Vg合成比较特殊,因其具雌雄同体性,个体先发育为雄性再发育为雌性,所以在雄性期和未成熟雌性期Vg不表达,随着雄腺的不断退化,慢慢可以在血淋巴中检测到Vg的产生。 2 甲壳动物及氨基酸序列 甲壳动物Vg是一种高分子量的磷酸脂糖蛋白,一般含有糖和类胡萝卜素成分,由多个多肽亚基(2~11个不等,以3个亚基居多)组成,不同物种间其分子量差异很大。在大多数已被研究的物种中,Vg分子结构可大致分为3部分:位于N端的脂磷蛋白Ⅰ部分;位于中间的由富含磷酸化丝氨酸的高磷蛋白部分;位于C端的脂磷蛋白Ⅱ部分、卵黄磷蛋白和卵黄糖蛋白部分。 Vg在卵母细胞内被水解酶(如组织蛋白酶D)酶切修饰后,加工成卵黄磷蛋白(lipovitellin,Lv)和卵黄高磷蛋白(phosvitin,Pv)。Lv由一条重链(Lv H)和(Lv L)一条轻链组成,是一类含脂的大分子蛋白,为胚胎发育提供氨基酸和脂类等营养物质。Pv富含磷酸化丝氨酸,可以结合磷酸盐和钙离子,具有脂类运输的功能。此外在个别物种,Vg还可被水解释放出β1组分蛋白,它是一种不含有卵磷脂的小分子量卵黄蛋白。 到目前为止,已经在Gen Bank数据库中登录的Vg