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亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的检测 血尿不仅可以治疗疾病，还可以导致相关的病毒性感染。近年来人们对输血相关病原体,特别是输血相关病毒的传染越来越重视。通过加强对献血者和血液的筛选,虽然大大降低了输血相关传染病的发生,但由于检测技术的局限性、检测项目的有限性、新病毒不断出现等因素,仍不能完全杜绝输血相关的病毒感染。因此,对血液及其成分中的病毒进行灭活是保障输血安全的措施之一。 临床应用较多的是用单人份血浆进行病毒灭活,常用的方法是亚甲蓝光化学法(MB-P)。MB-P用于血浆病毒灭活在中国血站系统已得到广泛采用,并取得了良好的临床效果。为了解MB-P对血浆质量的影响,本文对本站的新鲜冰冻血浆、病毒灭活新鲜冰冻血浆、冰冻血浆和病毒灭活冰冻血浆各随机抽检20袋,进行了其血浆蛋白浓度,凝血因子Ⅷ含量的检测比较,并对灭活血浆进行了MB残留量的检测,现将试验结果报告如下。 1 材料和方法 1.1 冻血浆、病毒灭活新鲜不同债权 宝安区中心血站合格库中抽取已冰冻的新鲜冰冻血浆、病毒灭活新鲜冰冻血浆、冰冻血浆和病毒灭活冰冻血浆各20袋。37.0 ℃水浴复溶(小于6 min)后取样10 mL。 1.2 仪器和试剂 1.2.1 pelcd-ms-u 可见紫外分光光度计(上海精科 722N),固相萃取装置(美国SUPELCD),全自动生化分析仪(深圳蓝韵LWC100 plus),全自动血凝仪(日本希森美康CA-500),离心机(日本2100),固相提取小柱(美国Waters公司Waters OASIS)。 1.2.2 试剂和标准血清 总蛋白试剂盒(上海科华)、凝血因子Ⅷ(日本希森美康)、MB(天津市光复精细化工研究所)、甲醇、冰乙酸(天津市致远化学试剂有限公司)和标准血清(北京康彻思坦公司提供)。所有试剂均由获得卫生部生产许可证和批准文号的厂家提供,有中国药品生物制品研究所批批检合格报告并在有效期内使用。 1.2.3 血浆病毒灭活箱 一次性使用病毒灭活输血器材(上海输血技术有限公司),血浆添加MB后,将光照袋中含MB的血浆在医用血浆病毒灭活箱中2~8 ℃、30 000~38 000LX光照35 min后,过滤。 1.3 方法 1.3.1 血浆蛋白浓度 蓝韵LWC100 plus全自动生化分析仪检测(双缩脲比色法),按操作规程和试剂使用说明书进行。 1.3.2 凝血因子：g 日本希森美康CA-500血凝仪检测,按操作规程和试剂使用说明书进行操作。 1.3.3 标准对照血浆配制 固相萃取比色法:(1)标准品血浆的制备:取MB粉末约38 mg,精密称定,置100 mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度。精密量取50 μL置50 mL容量瓶中,以1∶100的比例加入50 mL混合血浆(10人份以上血浆混合)中,配成最终浓度约为1.0 μmol/L的MB的标准对照血浆。(2)30%甲醇配制:30 mL甲醇用蒸馏水稀释至100 mL。(3)洗脱液配制:1 mL乙酸,用甲醇稀释至100 mL。(4)用3 mL Waters OASIS小柱,置于真空萃取装置上,用6 mL甲醇活化,加入6 mL受检血浆或标准品血浆,萃取MB;用30%甲醇6 mL清洗,随后用含1%乙酸的甲醇溶液2 mL洗脱,洗脱液离心(3 500 rpm/10 min),取上清液。用含1%乙酸甲醇溶液作试剂空白,在654±2 nm波长处测定吸光度。经计算得到血浆中MB残留量。 1.4 统计处理 血浆病毒灭活前后变化比较,采用自身对照配对t检验,P0.05具有统计学意义。 2 mb-p病毒灭活前后血浆蛋白浓度和凝血因子含量的变化 2.180份血浆标本(新鲜冰冻血浆、病毒灭活新鲜冰冻血浆、冰冻血浆、病毒灭活冰冻血浆)主要质量指标血浆蛋白浓度和凝血因子Ⅷ含量见表1。从表1可知,MB-P病毒灭活前、后血浆蛋白浓度和凝血因子Ⅷ含量的变化不大,经比较差别无统计学意义(P0.05)。 2.2病毒灭活后血浆外观和色泽符合要求,血浆中MB残留量为0.05~0.357 μmol/L(0.14±0.09 μmol/L)。 -:无数据。 3 mb-p是安全有效的血浆病毒灭活方法 本站目前年采血液10×103kg左右,实现成分分离99%以上,仅仅依靠献血者筛选和血液检测不可能完全杜绝输血相关的病毒感染。亚甲蓝又名美蓝, 是一种酚噻嗪类化合物,在临床上作为解毒药用于治疗氰化物和亚硝酸盐引起的高铁血红蛋白症和抑郁症。应用MB-P灭活血浆病毒灭活机制:亚甲蓝可与病毒核酸的鸟嘌呤以及病毒的脂质包膜相结合,在可见光的作用下,可使病毒的核酸断裂,包膜破损,使病毒完全失去穿透、复制及感染能力,从而达到灭活病毒(脂包膜病毒和一些非脂包膜病毒如甲型肝炎病毒和细小病毒B19等)目的。因此,MB-P处理灭活病毒的临床推广应用能大大减少病毒感染的几率,是保证