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樟树和黄花蒿的生物活性研究 樟树也被称为樟树科多年生树木，属于樟树科。它生长在潮湿、肥沃的土壤中，在房屋和村庄附近，主要分布在中国长江流域、西南部和日本。其植物组织的化学成分有芳香油﹑樟油﹑芳樟醇﹑柠檬醛等物质。黄成华报道了樟树的枝叶对菜青虫(菜粉蝶幼虫)具有一定的生物活性,但没有做具体的研究。黄花蒿(Artemisia annuaL.)别名香蒿、臭蒿,属菊科一年生草本植物,生于荒坡、林缘,分布于全国,化学成分有青蒿素(Arteammium)、青蒿酸、青蒿酸甲脂、青蒿酮、异青蒿酮、丁香烯等。李云寿等测定了黄花蒿对菜青虫的触杀作用,但没有对拒食作用进行具体的研究。本项工作在前人研究的基础上,研究了樟树和黄花蒿的提取溶剂及其粗提物对菜青虫的杀虫活性和作用方式,为研究和开发新的植物性农药提供试验依据。 1 材料和方法 1.1 植物基岩浸提液盐过滤法 樟树枝叶,于2002年10月17日采自长江大学樟树林,采收时处于结果期。黄花蒿,于2002年10月20日采自本校试验田,采收时处于结果期,采收部位为植物地上部分。植物材料自然晾干后将其茎秆切成1~2 cm长,连同叶片用纸包好放入烘箱内,45~50 ℃以下烘干。 浸提溶剂为氯仿、石油醚、乙醇。 菜青虫(Pieris rapreL.),从本校试验田采菜粉蝶卵,放入培养皿中,孵化后将幼虫收集于玻璃缸中,以新鲜的甘蓝叶片饲喂,待幼虫发育至4龄时用于试验。 1.2 方法 1.2.1 提取植物活性物质 试验采用冷渍法。将称重后的干粉用5倍的浸提溶剂浸渍3 d,过滤后再重复2次,合并滤液即得相应的粗提物。 1.2.2 、石油醚的温度对稠物的分散 将需要浓缩的提取溶液加到旋转蒸发仪的克式烧瓶中,将乙醇、氯仿、石油醚的温度分别控制在60~70 ℃、50~60 ℃、40~50 ℃,减压浓缩至稠状物。50~60 ℃水浴干燥、称重,并将等量的稠状干物质用50 mL的容量瓶定容后放入冰箱中备用。 1.2.3 叶碟、菜青虫与平均摄食面积、拒食率的测定 将新鲜的甘蓝叶片用圆形打孔器(直径3 cm)打成叶碟。用移液管各取1 mL母液于100 mL的容量瓶中用清水定容(以相应的表面活性剂作增溶剂),再将叶碟在稀释液中浸15 s。待叶碟晾干后,放入直径为16 cm的培养皿中(内垫滤纸,加少量蒸馏水保湿)。将饥饿4 h的菜青虫放入供试培养皿中,每皿放6片叶碟、3头4龄的菜青虫。对照用清水(加入相应的表面活性剂)处理。每个处理30头试虫,3次重复。调查48 h后的平均取食面积。根据下列公式计算拒食率。 非选择拒食率(%)=对照取食面积?处理取食面积对照取食面积×100(%)=对照取食面积-处理取食面积对照取食面积×100 1.2.4 测定浓度的测定 试验采用浸渍法。稀释的方法同拒食率测定。6种粗提物的触杀作用测定浓度(DW,下同)为2.0 g·L-1;樟树和黄花蒿浸提物LC50的测定浓度分别为:2.815、 2.086、1.250、 0.834、0.623和3.075、 2.050、1.525、 1.025、 0.750 g·L-1。以清水作空白对照。每个处理30头试虫,3次重复。同一处理的试虫同时用小纱笼装好浸于药液中30 s,然后取出用滤纸吸干多余水分后放入不同的培养皿中。用新鲜叶片饲喂,48 h后统计死亡虫数,采用直线回归法计算毒力曲线和LC50。 2 结果与分析 2.1 %是速度内的9.32%,是深化了l.9%的要求,在情况下,还存在着设备条件上的一些矛盾,导致了“出现不符合测试要求”的现象,这4. 乙醇、氯仿和石油醚3种溶剂对樟树的浸提率分别是11.51 %、6.30 %、5.67 %;对黄花蒿浸提率分别是6.12 %、6.21 %、5.71 %。也就是说对黄花蒿而言3种溶剂的浸提率差异不显著,而樟树的极性溶剂的浸提率要明显高于弱极性溶剂的浸提率。 2.2 分子极性测定 测定结果表明(表2),黄花蒿乙醇粗提物、樟树石油醚粗提物拒食活性较高,分别达到72.11 %和57.86 %。可以初步判断黄花蒿的拒食活性物质的分子极性较樟树高。两种植物不同溶剂的粗提物触杀活性排序与拒食活性完全一致,仍以黄花蒿的乙醇粗提物和樟树的石油醚粗提物活性最高。 2.3 两种粗提物毒力测定,各有侧重 在上述研究基础上,分别将活性最高的两种粗提物进行接触毒力测定,以进一步明确两种粗提物的毒力大小。测定结果表明(表3),樟树石油醚浸提物和黄花蒿乙醇浸提物的LC50分别为1.275和1.232 g·L-1,两者对菜青虫的毒力基本相似。 3 树石油醚浸提物对菜青虫的拒食活性 樟树和黄花蒿有效成分的最佳浸提溶剂分别是石油醚和乙醇,黄花蒿乙醇浸提物对菜青虫的拒食活性明显高于樟树石油醚浸提物。而两者对菜青虫的触杀毒力基本相同。樟树和黄花蒿的粗提物对菜青虫