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微弧氧化处理的纯钛材料生物相容性及组织反应研究 作为一种医疗钛材料入体表面活性剂的方法，微弧氧化的相关处理技术得到了许多科学家的关注。根据牙种植体的特点,我们结合微弧氧化的基本原理与电泳原理,对工艺进行反馈调整后得到了适用于牙种植体的改良MAO工艺,并进行了系列的材料学测试和基本的体外生物相容性的研究。本研究利用家兔作为实验动物,按照GB/T16886.6的国家医疗器械生物学评价标准,对改良后MAO方法处理的纯钛试件进行进一步的皮下埋置实验。 1 材料和方法 1.1 mao加工工艺 健康成年新西兰大白兔12只(第四军医大学实验动物中心提供),雌雄不限,随机平均分为3组。植入试件均采用厚度1 mm纯钛材料,400目硅酸盐砂纸表面抛光,裁成直径10 mm圆片共72枚,MAO工艺处理36枚,另外36枚作为对照。MAO主要参数选择如下:频率600 Hz,脉冲电压500 V。电解液主要成分:乙酸钙,甘油磷酸钙,磷酸钙盐,碳酸钙盐等。植入实验前,所有试件均用大量去离子水冲洗,依次经丙酮、无水乙醇超声清洗10 min,去离子水冲洗后烘干,常规湿热法消毒。 1.2 mao处理及未处理试验件的处理 实验动物采用30 g·L-1戊巴比妥溶液按照1.0 mL·kg-1进行静脉麻醉,以脱毛剂将动物背部脱毛,按照无菌手术操作原则,在背部皮肤作切口后在浅筋膜下钝形分离,保持10 mm以上距离制备6个皮下囊,分别植入MAO处理及未处理试件各3枚后缝合隧道开口,防止植入体移动,冲洗缝合伤口。手术后前3日肌肉注射青霉素,注意观察伤口愈合情况,7日后拆除手术缝线,分别于4周、8周、12周以超剂量麻醉方法无痛处死动物,将试件与周微软组织整体取出常规固定或将试件取出做SEM分析。标本固定完全后脱水至蜡,此时再将标本中的试件与软组织小心分开,包埋切片,常规HE染色。 1.3 组织学评价“纤维包膜厚度t 1)术后动物评价及标本肉眼观察。2)组织学评价,包括纤维包膜厚度,组织变性及坏死情况,炎症细胞类型及程度。3)试件表面的SEM及EDX分析。 2 mao处理的组织学观察 2.1 术后伤口无感染及血肿,动物存活状态良好,无其他异常情况。 2.2 大体观察 标本周围可见半透明纤维薄膜,无粘连及异物。4周组所有试件周围薄膜有少量充血现象,8周及12周组试件包膜明显变薄,MAO组试件表面有较薄的白色沉积物,两组之间差别不明显,纯钛对照组与植入前差别不明显。 2.3 组织学观察 4周组试件周围包膜厚度在80～120 μm之间,有多层梭形成纤维细胞及胶原纤维沿包膜长轴排列,可见少量的淋巴细胞散布于包膜中及周围,包膜周围有明显的毛细血管增生现象,未见到材料碎片或组织变性坏死情况,见图1。8周组与12周组试件的组织学变化类似,包膜厚度在20～50 μm之间,有新生毛细血管位于其中,淋巴细胞已难见到,见图2、图3。各时间点对照组与MAO处理组的组织学特点没有明显区别。 2.4 试件表面的SEM及EDX 4周时,实验组试件大部分表面出现一层无定形沉积物,厚度约10～20微米,见图4,EDX分析其成分主要为Ti,O,Ca,P,N元素。8周时,实验组试件表面已经全部覆盖一层沉积物,见图5,EDX分析组成与4周时相同,其中C,N元素的相对含量明显升高,Ca,P元素相对减少,Ti元素保持不变。12周时与8周时结果类似,见表1。对照组试件在各个时间点表面都无明显沉积层,EDX分析主要为Ti和少量的O。 3 材料的生物建设为本实验系统误差提供了实验条件和材料基础 一种体内植入材料在应用于临床之前,必须要经过动物体内的长期植入实验,在组织学水平上进一步评价其生物相容性,本研究选择3个时间点,对MAO植入材料的慢性和和亚慢性皮下植入局部反应进行综合评价。 纯钛是公认的具有良好生物相容性的材料,本研究以纯钛作为对照来评价MAO处理对材料生物学性能的影响,除了符合有关医疗器械生物学评价的国家标准,还可以同时保证材料的理化性质接近,如硬度,形状等,而且手术前所用的试件表面清洁和消毒程序也完全相同,因此可以在最大程度上控制本研究的系统误差。 理论上来讲,任何材料对生物体都是一个异物,生物体必然要对其产生急性免疫应答反应,本实验中,实验组试件植入后机体对其产生的反应与纯钛材料试件在各个时间点都基本相同,而且从长期来看(12周)其急性炎症反应形成的纤维包膜逐渐变薄,这就说明实验组试件的生物相容性较好,类似于纯钛材料,在植入机体后,不会对如组织产生毒害作用。 关于微弧氧化处理后的钛合金表面在体外模拟体液实验中所表现出来的较强的磷酸钙盐诱导沉积能力,已有不少研究报道。而皮下埋置环境与体外环境有很大的不同,多种组织细胞及生物大分子可能参与和控制钙磷等元素的沉积过程,有文献报道,蛋白质分子可以减弱和抑制这一过程,这与本实验