实验三、简单染色法-支持高清浏览.pptxVIP

实验三 细菌的简单染 色 目的要求 • 学习微生物涂片 、 染色的基本技术 ， 掌 握细菌的简单染色法。 • 初步认识细菌的形态特征。 • 学习显微镜（油镜） 的使用方法 ， 熟悉 无菌操作技术。 • 简单染色： 利用单一染料对菌体进行染色。 • 染料是一类苯环上带有发色基团和助色基 团的有机化合物 。 前者赋予染料颜色特征 ， 后者使染料能形成盐。 • 常用的微生物细胞染料都是盐 ， 分酸性染 料和碱性染料两大类： 美蓝（即亚甲蓝） 、 结晶紫 、碱性复红 、 番红（即沙黄） 、孔 雀绿等都属于碱性染料； 酸性复红 、伊红 及刚果红属于酸性染料。 微生物染色原理 ·在中性 、碱性或弱酸性溶液中 ， 细菌细胞 通常带负电荷； 碱性染料在电离时 ， 其分 子的染色部分带正电荷 ， 易与细胞结合使 其着色。 ·细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产 酸） ， 所带正电荷增加 ， 可采用酸性染料 染色。 材 料 • 菌种 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 • 染色剂 • 仪器或其他用具： ➢显微镜 ➢酒精灯 ➢载玻片 ➢接种环 ➢香柏油 ➢二甲苯 ➢擦镜纸 ➢生理盐水等。 简单染色方法 干干燥燥 干干燥燥 镜镜检检 水水洗洗 涂涂片片 染染色色 固固定定 作业 • 实验报告 （结果部分： 绘图说明金黄色葡萄球菌和枯草 芽孢杆菌的形态特征 ， 注明观察时使用的物 镜及放大倍数） 下一个实验： 革兰氏染色法 1 、涂片 • 取一块干净的载玻片 ， 平放 ， 在载玻片中央 滴一小滴生理盐水； • 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌 苔； • 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混 匀并涂成薄膜。 注意： 载玻片要洁净无油迹； 滴生理盐水和取 菌不宜过多； 涂片要涂抹均匀 ， 不宜过厚。 2 、干燥 ·将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然 干燥 。 也可用电吹风低温吹干。 3 、 固定 ·手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌 的载玻片， 涂面朝上 ， 在酒精灯火焰上通过2 3次。 原理： 加热使细菌细胞的蛋白质凝固 ， 从而固 定细菌细胞形态 ， 并使之牢固附着在载玻片 上。 注意： 热固定温度不宜过高 ， 否则会改变甚至 破坏细胞形态。 4 、染色 ·将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架 上 ， 滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖 涂片薄膜为宜） 。 ·染色时间： ➢吕氏碱性美蓝染色1 2min； ➢石炭酸复红染色约1min ➢草酸铵结晶紫染色约1min。 ~ 5 、水洗 ·将细菌涂片上染液倒入废液缸中； ·手持细菌染色涂片 ， 置于废液缸上方 ， 用洗瓶中自来水冲洗涂片 ， 直至流下的 水无色为止。 注意： 水洗时 ， 不要直接冲洗涂面 ， 而应 使水从载玻片的一端流下 。水流不宜过 急 ， 过大 ， 以免涂片薄膜脱落。 6 、干燥 · 自然干燥： 平放于室温 ， 自然干燥； · 吹干： 用电吹风冷风或低温热风吹干； ·吸干： 平放在一张吸水纸上 ， 上面覆盖 一张吸水纸 ， 将细菌涂片两面水分吸干。 7 、镜检 • 涂片干后镜检。 • 防止水的折射 ， 以便于观察。 1 . 物镜转换器 2 . 物镜 3 .标本夹 4 .载物台 5 . 聚光器 6 . 彩虹光圈 7 .光源 8 . 镜座 9 . 电源开关 10 . 光源滑动变阻器 11 . 粗调螺旋（粗调节器） 12 . 微调螺旋（细调节器） 13 . 镜臂 14 .镜筒 15 . 目镜 16 . 玻片夹推进器 显微镜的基本结构（P41） 显微镜使用操作步骤 1 、观观察察前前的的准准备备 2 、显显微微镜镜观观察察 3 、显显微微镜镜使使用用完完毕毕后后的的处处理理 1、观察前的准备 · 仔细阅读显微镜使用说明书 · 取镜（ 一手握镜臂 ， 一手托底座） · 显微镜的放置（平放 ， 距边缘约10cm） · 熟悉显微镜 ， 检查显微镜 · 调节光源（光线均匀 ， 亮度适宜） · 调节双筒显微镜的目镜 · 调节聚光器数值孔径 · 检查显微镜物镜 、 目镜 、 聚光器 2、显微观察 观察程序如下： ·放放置置观观察察标标本本 ·低低倍倍镜镜观观察察 ·高高倍倍镜镜观观察察 ·油油镜镜观观察察 放置观察标本 ·将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)， 用标本夹夹住 ， 移动推进器使观察对象处 于物镜的正下方。 低倍镜观察 · 下降低倍物镜 ， 从侧面注视调节 ， 使其接近标 本。 · 双眼看目镜 ， 慢慢旋转粗调节螺旋使镜筒缓慢 升起 ， 至视野内出现物象后 ， 改用细调节螺旋， 上下微微转动 ， 直至视野内获得清晰的物象。 · 慢慢移动玻片夹推动器 ， 寻找要观察的部位 ， 置于视野中心 ，