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百合知母汤治疗围绝经期综合征的临床研究 闭经综合征是指女性月经前后的一系列症状，由于卵巢功能的逐渐削弱和体内雌激素水平显著下降，导致一些严重的植物神经功能障碍。目前国内外常采用激素替代治疗, 但长期使用副作用明显, 如乳腺癌、子宫内膜癌、血栓和胆囊疾病的发生率明显增加。中医药防治围绝经期综合征以全面调理为主, 在中医学整体观念的指导下, 运用中药可避免激素替代疗法产生的各种副作用。百合知母汤, 方出自张仲景《金匮要略》, 临床常以百合知母汤中2味药为主药, 随证配伍后治疗围绝经期综合征, 有一定疗效。 本实验以百合知母汤为研究对象, 观察其对围绝经期肾阴虚和肾阳虚证大鼠的体征和脑内单胺类神经递质的影响。 1 实验材料 1.1 甲状腺素片、企业与合成产物 百合知母汤 (百合30 g, 知母21 g) , 制成含生药量为0.5 g/mL水煎液。甲状腺素片, 浙江尖峰药业有限公司, 批号:060703;腺嘌呤, 南京赛吉科技有限公司;去甲肾上腺素 (NE) , 多巴胺 (DA) , 由Fluka提供;5-羟色胺 (5-HT) , 由Sigma提供;内标 (3, 4-二羟基苄胺氢溴酸盐) , Aldrich。 1.2 %5g 清洁级SD大鼠, 雌性, 3月龄大鼠, 体质量200~220 g;15~16月龄大鼠, 体质量350~500 g, 由河南省实验动物中心提供, 生产许可证号:SCXK (豫) 2005-0001。 1.3 电化学检测 DY89-I型电动玻璃匀浆机, 宁波新芝科器研究所;LGR16-W低温高速离心机, 北京医用离心机厂; LC-10A高效液相色谱仪, 日本岛津 (CTO-10Avp 柱温箱;L-ECD-6A电化学检测器;SIL-10A自动进样器;LC-10AD泵;CLASS-LC10 VER1.63工作站;venusil MP C18反相柱, 4.6 mm×250 mm, 5 μm, Agela) ;ECG-6511心电图机, 上海光电医用电子仪器有限公司。 2 方法 2.1 肾阴虚参种及肾阳虚+百合知母汤治疗 连续阴道涂片15 d, 呈现不规则动情周期的作为围绝经期大鼠。随机分为6组, 即①围绝经期对照组;②围绝经期+百合知母汤组;③围绝经期肾阴虚组;④围绝经期肾阴虚+百合知母汤组;⑤围绝经期肾阳虚组;⑥围绝经期肾阳虚+百合知母汤组;⑦另取10只3月龄青年雌鼠作为青年对照组。 2.2 各组大鼠造模及模型建立 ③、④组大鼠每日灌胃甲状腺素2.5 mg/只, 连续21 d, 造成肾阴虚模型。⑤、⑥组大鼠每日灌胃腺嘌呤200 mg/kg, 造模全过程为21 d (d 1~11每日给药1次, d 11后隔日给药1次) , 造成肾阳虚模型。于开始造模1周后, ②、④、⑥ 组每日按5 g/kg剂量给药1次, 其余组给予等量生理盐水, 连续给药3周。 2.3 测量指标 2.3.1 日导致的饮酒量 每日观察大鼠外貌、行为等活动, 记录其饮水量和摄食量;每周测量大鼠体质量, 于末次给药后测量其肛温, 并在大鼠安静状态下, 用心电图机测定心率。 2.3.2 流动相da、l 于末次给药后次日断头处死大鼠, 4℃冰台上迅速分离出下丘脑, 液氮冷冻, 固化后精确称质量, 加入475 μL 0.1 mol/L高氯酸 (含0.5 mmol/L的EDTA, 47.5 ng半胱氨酸) 和25 μL内标液, 于冰浴下快速玻璃匀浆, 4℃条件下15 000 r/min离心15 min, 取上清液作为待测样品。采用高效液相色谱-电化学法测定样品中NE、DA、5-HT的含量。流动相参照文献的方法略作改进:乙酸钠:60 mmol/L;柠檬酸:100 mmol/L;EDTA:0.1 mmol/L;甲醇∶水=1∶9。流速为1 mL/min, 柱温:25℃, 进样量:20 μL, Ag/AgCl参比电极, 工作电压为+0.75 V。 2.4 统计方法 所有数据均用Excel进行统计, 组间比较采用t检验。 3 结果 3.1 百合知母汤对大鼠体质量的影响 围绝经期对照组大鼠与青年对照组比较体质量增长缓慢、心率减慢 (P0.01) , 饮水量略有增加、摄食量和体温变化不明显。围绝经期肾阴虚组大鼠体温升高、心率加快 (与围绝经期对照组比较P0.05) , 体质量减轻、饮水量略有增加;当给予百合知母汤后, 大鼠摄食量增加、体温下降、心率减慢 (与围绝经期肾阴虚组比较P0.05) 。围绝经期肾阳虚组大鼠体质量明显减轻、摄食量减少、体温降低、心率减慢 (与围绝经期对照组比较P0.01) ;但当给予百合知母汤后, 上述各项指标均无明显好转现象 (见表1) 。 3.2 百合知母汤治疗 围绝经期对照组大鼠下丘脑NE含量降低、DA和5-HT含量升高, DA/NE和5-HT/NE比