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气阴两虚型肺癌小鼠模型的建立及评价 近年来，关于肺癌的研究取得了很大进展。然而，在这项研究过程中，西医的肺癌模型被广泛使用，中医的症状与气阴两虚的特点一致。本研究在传统的肺癌造模方法的基础上,采用灌服温热性中药、刨花烟熏,以建立与临床证候相吻合的肺癌气阴两虚证C57BL/C模型,并从血清IL-1、MDA水平等方面对其进行初步评价。 1 实验材料 1.1 实验动物与设备 C57BL/6纯系小鼠,雌雄各半,体质量18~20g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,合格证:SCXK(京)2010-2011。 1.2 tax肿瘤 1.3 仪器、检测方法 全自动高速冷冻离心机(GL-20A,湖南离心机厂);台式离心机(TDL80-2B,上海安亭科学仪器厂);倒置显微镜(XDS-1B,重庆光电仪器有限公司);细胞计数器(柯桥医疗器械厂);FJ-2021型γ放射免疫计数仪,国营二六二厂;AE240型电子天平,瑞士METTLE公司。 1.4 主试剂 放免试剂盒(IL-1 RIA KIT)购自海军放免技术中心,MDA试剂盒购自南京建成生物研究所。 1.5 水制备浓缩设备 麻黄、制附子、细辛、天南星各9g,购自山东省中医院。水煎浓缩到1g/m L,冰箱4℃存放。金复康口服液(江西江中制药厂生产,含生药3g/mL) 2 实验方法 2.1 气阴两虚模型 C57BL/6纯系小鼠30只,随机分为对照组、气阴两虚模型组和金复康口服液组,每组10只。气阴两虚模型组和金复康口服液组小鼠给予灌胃温热中药,0.4m L/只,1天1次,连续10天。每天给药后同时应用刨花烟熏30min,连续10天,建立气阴两虚模型。第11天,C57BL纯系小鼠右前肢腋皮下接种Lewis肺癌实体肿瘤,建立气阴两虚型肺癌实验动物模型。对照组10只,仅腋下接种Lewis肺癌实体肿瘤。造模成功后金复康口服液组给予金复康口服液(30g/kg·d)进行干预,另外两组不给予药物干预,各组小鼠均饲养于同样条件下。 2.2 测试指标 血清IL-1采用放射免疫分析法测定,按说明书操作。血清MDA采用酶联免疫法(ELI-SA)测定,按说明书操作。 2.3 统计方法 3 结果 3.1 肿瘤组织病理学检测 各组小鼠移植lewis肺癌后造模成功,观察见瘤体呈局部结节样生长,表面光滑,不易活动。光镜检查镜下见瘤组织均呈现中低分化的腺癌特征。多呈大小不一,形状不规则的腺管状,可见腺腔样结构,间质为纤细的纤维组织。瘤细胞呈浸润生长,坏死较少。间质有较多微血管形成。证实移植瘤成功。中药造模过程中小鼠无死亡。 3.2 各组小鼠的il-1和mda水平的比较 4 肺气阴两虚模型,肺氧化合成反证药物 本实验在采用“烟熏法”制备肺气虚、借药性的偏性制备肺阴虚动物模型的基础上,移植lewis肺癌,制备与临床证候相吻合的气阴两虚型肺癌动物模型。造模中药由麻黄、制附子、细辛、天南星等分组成。麻黄,辛、微苦、性温主入肺经,功能发汗解表。由于血汗同源,津血互生互化,发汗日久,阴血津液耗伤,气亦随津而散,则肺之气阴损伤,荣华失养,皮槁而毛拔。附子、细辛二药,性温热,功能温阳、通窍,其偏性也兼有伤阴耗气之弊,为阴虚患者所慎用。天南星辛、苦、温而燥烈,归肺经,具有燥湿化痰功。明·倪朱谟在《本草汇言》中称“南星之性燥而颇急……南星之辛劣而善行”,“如阴虚血少、血热血燥之人不可用也。”故借用其来伤阴耗气。上四味中药或具辛散耗气伤津或具热性伤阴之弊,入于肺经,故选作肺气阴两虚动物造模用药。 对于肺癌阴虚本质的研究,申维玺等应用免疫组化方法观察肺癌患者肺巨噬细胞等非肿瘤细胞中相关因子的表达,认为IL-1、TNF-α水平升高是肺阴虚证的本质。蔡圣荣等通过观察肺气虚证大鼠血气分析、血清肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)、内皮素(ET)、丙二醛(MDA)含量的变化,认为肺气虚证大鼠血清中TNF-α、ET、MDA含量的变化可作为肺气虚证重要的客观指标之一。本实验结果表明,造模小鼠血清IL-1、MDA水平显著高于对照组(P0.05,P0.01)。金复康口服液是以益气养阴为主中药组成的抗癌复方制剂,临床对气阴两虚型肺癌疗效显著。研究表明,该复方能抑制肿瘤细胞增殖和增强免疫功能的作用,升高CD3、CD4、IL-2、IFN-γ含量,降低IL-10含量,对肿瘤宿主的免疫功能具有显著的上调作用。因此本实验以该药作为气阴两虚模型的反证方剂。结果表明,造模动物服用金复康口服液后血清中IL-1、MDA水平明显下调。 本实验结果表明,在烟熏结合灌服温热性中药的基础上移植lewis肺癌的方法来建立肺癌气阴两虚证模型是可行的,IL-1、MDA等指标可能用来作为评价该模型是否成功的检测指标。 由中国医学科学院药物研究所药理室提供。 采用方差分析。 见表1。