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病毒包装问答小百科

慢病毒（Lentivirus,LV）是由人类免疫缺陷病毒（HIV）改造而来的一种病毒载体，属于逆转录病毒。慢病

毒可将特定基因片段随机、稳定地整合到宿主细胞的基因组中，实现目的基因的持续稳定的表达目的产物，

因此，目前慢病毒载体已经广泛地应用于基因的表达调控如过表达，干扰和基因敲除。

腺相关病毒（Adeno-associatedvirus,AAV）由直径约26nm的二十面体蛋白质衣壳和约4.7kb的单链DNA

基因组组成。主要以游离于染色体的附加体形式存在，并可长期存在于非分裂期的细胞中。由于具有高组

织特异性、低免疫原性、良好的扩散性、高安全性以及宿主范围广等特点，AAV特别适用于体内的研究，

且已成为基因治疗领域中最具前景的病毒载体之一。

然而，在做病毒包装实验中，科研工作者常遇到一些问题，比如为何我的病毒包装出毒量很低？包装出来

的病毒感染细胞效率低？感染细胞后生长状态差等，为了让大家在病毒包装这块少走弯路，赛业生物针对

病毒包装常见的问题为大家进行经验总结与心得分享。

Lentivirus,LV

一、慢病毒（）

1、慢病毒（LV）几个基本概念

(1)滴度（Titer）：单位体积液体中有感染能力的病毒数目；单位：TU/mL（活性滴度单位），指每毫升

中含有的具有生物活性的病毒颗粒数；TU为“transducingunits”的缩写，中文为“转导单位”，表示

可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。

(2)MOI（multiplicityofinfection）：感染复数，感染时活的病毒颗粒数和细胞数量比值；MOI值病毒滴

度（TU/mL）×病毒体积（mL）/细胞个数。

2、你们是用什么方法来检测LV滴度的？

慢病毒滴度的测定方法主要有4种，即Elisa法检测病毒颗粒中p24蛋白，PCR法检测病毒颗粒RNA和检

测整合到基因组的病毒DNA，以及通过FACS对荧光蛋白的表达水平。

我们采用的是定量PCR检测整合到细胞（293T）基因组中病毒DNA的方法，慢病毒介导外源基因以逆转

录方式整合进目的细胞基因组，此方法只检测有活性的且经过逆转录的病毒DNA，检测结果相对最准确。

因为ELISA和检测病毒RNA的方法检测的只是病毒颗粒的量，包括无活性的病毒颗粒，这会使得滴度检

测结果偏高，而我们实验是需要有活性的慢病毒才能发挥转染作用，FACS法所检测的荧光蛋白则受到启动

子及荧光蛋白在目的细胞表达水平的影响，会使得检测结果偏低。

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3、LV多久能拿到病毒？拿到后LV怎么保存？

一般情况，慢病毒包装整个过程包括载体构建（2~3周），病毒包装+扩增（1~2周），检测（约1~2周），

顺利的话4周左右可以拿到病毒，慢的话不会超过6周。

收到病毒后若要长期保存则需放入–80℃冰箱，可保存一年左右；若一周内可以用完，则放入4℃冰箱即可，

建议不超过3天。慢病毒应尽量避免反复冻融，理论上每次冻融会让病毒活性降低约10%，因此对于冻融

的病毒，使用前建议重新进行滴度检测，或考虑分装使用。

4、怎么确认我的实验需要多少LV病毒量才够？那么多规格该怎么选？

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(1)由于LV的感染谱很广，可以感染分裂期和非分裂期的细胞，对于大部分的细胞类型，采用1×10TU/mL

的规格即可满足要求，另外由于目前慢病毒多用于体外细胞的感染而少用于体内注射，因此非纯化亦

可。

(2)对于难感染的细胞，如原代细胞，需要较高的MOI，需要的病毒量也较多，建议选高规格，如1×109

TU/mL。

(3)对于较为少见的细胞类型所需要的病毒量，可通过参考文献或预实验确定。

5、慢病毒载体最大可插入多大的基因片段？

慢病毒载体的载量为6-6.5kb左右，但一般建议插入的片段大小不超过5kb，这样包装出来的病毒滴度较高，

若超过6kb则会显著降低病毒滴度。实际病毒包装中，我们常需要插入报告基因（如GFP）和抗性基因（如

Puro），这使得目的片段的容量进一步缩小至3kb左右。我们目前通过载体优化，例如删去不必要的基因，

减小启动子长度，可使目的基因的片段容量扩大到4kb左