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正交优选茯苓多糖提取工艺

cyphones（schw.）wolf，又名flav，racema，紧挨云南、安徽、湖南等省。茯苓是一味使用历史悠久的中药,在《神农本草经》中被列为上品,谓其“主胸胁逆气,利小便,久服安魂宁神,不饥延年。”《本草纲目》也记载:茯苓“治头风虚眩,暖腰膝,主五劳七伤。”历代医家均肯定茯苓既有滋补强身作用,又有渗湿利水、益脾和胃、宁心安神之功。茯苓药性缓和,补而不峻,利而不猛,既能扶正,又可祛邪,能治疗脾胃虚弱、遗精早泄、心悸失眠、健忘多梦、小便不利、呕吐腹泻等症。其主要有效成分茯苓多糖是一种非特异性免疫促进剂,其不仅能够提高机体的抗病能力,还有较强的抗癌作用。为了提高茯苓多糖的提取得率,我们以茯苓多糖为考察指标,进行加热回流和超声波提取茯苓多糖的对比实验。现报道如下。

1江苏、上海水质分析

UV-2550型紫外可见分光光度仪(日本岛津),超声波清洗器(KQ-100DB型,江苏昆山),FA1004电子分析天平(上海良平仪表有限公司)。茯苓(湖南靖州),葡萄糖标准品(供含量测定用,批号110833-200503,中国药品生物制品检验所),苯酚,氢氧化纳,冰乙酸,无水乙醇,丙酮,碳酸氢纳,浓硫酸和铝片等。

2方法和结果

2.1茯苓多糖含量的检测

根据茯苓多糖的理化性质,以及大生产中的可行性原则(减少工序,降低成本),选取提取次数、药品粒度、固液比(提取溶液为0.5%的NaOH溶液)、提取时间为考察因素,进行L9(34)正交实验,以茯苓多糖的含量(用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定)为评价指标,优选两种方法的最佳工艺。因素水平见表1～2,实验设计与结果见表3～4,方差分析见表5～6。

2.2结果分析

2.2.1提取工艺的确定

由表3可知,极差中C项最大,D项最小,即该4个因素对用加热回流提取多糖产量的影响程度由大到小为:CABD,表明在加热回流的实验条件下,就茯苓多糖的产率而言,各因素对其影响的主次顺序是:固液比药品粒度提取时间提取次数,而由表5知因素C对用该方法提取茯苓多糖有显著影响,就多糖产率而言所选最适宜的提取工艺条件为:A2B3C2D3。综合考虑,用加热回流的方法提取茯苓多糖的最佳工艺条件为:药品粒度为40目,提取时间为100min,固液比为1∶12,提取次数为2次。

2.2.2超声提取茯苓多糖正交试验

根据表4可以知,极差中B项最大,C项最小,即该4个因素对用超声提取茯苓多糖的产量的影响程度由大到小为:BDAC,表明在超声提取该实验条件下,各因素对其影响的主次顺序是:提取时间提取次数药品粒度固液比,由表6知因素B和D对用该方法提取茯苓多糖有极显著的影响,因素A对用该方法提取茯苓多糖有显著影响,就多糖产率而言所选最适宜的提取工艺条件为:A1B2C2D3。综合考虑:用超声提取茯苓多糖的最佳工艺条件为:药品粒度为20目,提取时间45min,固液比为1∶10,提取次数为3次。

2.3超声回流提取茯苓多糖最佳条件的确定

在加热回流提取最佳条件下(药品粒度40目,提取时间为100min,固液比为1∶12,提取次数为2次)进行3次重复实验。结果见表7。

从表7可看出,加热回流提取茯苓多糖中最佳提取工艺条件具有较好重复性,茯苓多糖的产率较高,说明该最佳提取工艺是合理可靠的。

在超声提取最佳条件下(药品粒度为20目,提取时间45min,固液比为1:10,提取时间为3次)进行3次重复实验。结果见表8。

从表8可看出,超声提取茯苓多糖中最佳提取工艺条件具有较好重复性,茯苓多糖的产率较高,说明该最佳工艺条件是合理、可靠的。

2.4茯苓多糖的提取

对加热回流提取工艺和超声提取工艺的最佳提取工艺进行t检验,得t=5.4121,α=0.05,f=3+3-2=4,t0.05/2(4)=2.776。故︱t︱t0.05/2,即P0.05,所以两种方法提取茯苓多糖有显著性差异。由实验结果可知,就茯苓多糖的提取得率而言,超声波提取法优于加热回流提取法。

3茯苓多糖含量测定的可行性

影响茯苓多糖的提取工艺的因素有:药品粒度、提取时间、固液比、提取次数、提取温度等。在本次的实验中,采用的是加热回流和超声波提取的方式,在回流提取中温度是一定值,故不列入考察范围之中。

本实验用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定茯苓多糖。精密度实验、重复性实验、稳定性实验、回收率实验等结果表明,用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定茯苓中的茯苓多糖含量合理可行,且该方法快速、准确、重复性较好。

本实验考察了影响药材有效成分提取的4个主要因素:药材粒度